【摘 要】
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目的 构建携带米非司酮(RU486)可调控β内啡肽(β-EP)基因的腺病毒(Ad-RUNEP).方法 构建携带RU486可调控β-EP基因的腺病毒穿梭质粒pDC312-RUNEP,重组得到Ad-RUNEP后进行扩增
【机 构】
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上海交通大学医学院附属瑞金医院麻醉科
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目的 构建携带米非司酮(RU486)可调控β内啡肽(β-EP)基因的腺病毒(Ad-RUNEP).方法 构建携带RU486可调控β-EP基因的腺病毒穿梭质粒pDC312-RUNEP,重组得到Ad-RUNEP后进行扩增,纯化和滴度测定,并分别在载体水平和病毒水平进行验证.Ad-RUNEP感染人皮肤癌上皮A431细胞株24 h后,将A431细胞株随机分为6个不同浓度RU486组(R0～5组),每组5孔,均加入RU486诱导β-EP表达,终浓度分别为0、10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mol/L,应用RU486孵育48 h后更换为不含RU486的培养液,于开始RU486孵育的第1天、第2天和第4天取培养液,离心后收集上清液,采用ELISA法测定上清液β-EP浓度.结果 经酶切鉴定表明RU486调控系统与β-EP均正确插入pDC312-RUNEP;Ad-RUNEP病毒滴度为2.25×1010pfu/ml.与R0组比较,R1～5组β-EP浓度升高(P＜0.05);与R4组比较,R1～3组β-EP浓度降低(P＜0.05);与孵育第1天比较,第2天时β-EP浓度升高(P＜0.05);与孵育第2天比较,第4天时β-EP浓度降低(P＜0.05).结论 成功构建了Ad-RUNEP,RU486对Ad-RUNEP合成β-EP具有良好的调控作用.
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