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目的：探讨人脐静脉内皮细胞（HUVECs）原代培养的方法，为体外研究血管内皮细胞功能提供实验基础。方法取健康剖宫产新生儿脐带15-20c m，2h内用0.1%I I型胶原酶37℃孵育12m i n得细胞，用改良M199培养液于37℃，5%C O2培养箱中培养，倒置显微镜下观察细胞形态特点，免疫组织化学染色进行细胞鉴定，管腔形成实验观察细胞传代后小管形成能力变化。结果采用0.1%I 型胶原酶灌注法及改良培养基可相当数量、细胞形态良好的HUVECs，利用Ⅷ因子相关抗原进行鉴定得到纯度大于99%，且传代后管腔形成能力与原代细胞无差别（P<0.05）。结论用0.1%I 型胶原酶分离方法和改良的M199培养基可得到数量多、形态好、功能稳定的人脐静脉内皮细胞，可成功构建体外研究血管内皮细胞的模型。