【摘 要】
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目的 制备重组人干扰素α2b（recombinant human interferon α2b,rhIFNα2b）单克隆抗体的亲和层析介质，并评价其纯化效果。方法 采用小鼠杂交瘤细胞融合技术及小鼠体内诱生法筛选并制备rhIFNα2b单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb），经AT Protein A亲和层析纯化，12%还原型SDS-PAGE鉴定纯度，Western blot法
【基金项目】
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吉林省重点科技成果转化项目（20160307028YY）；
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目的 制备重组人干扰素α2b（recombinant human interferon α2b,rhIFNα2b）单克隆抗体的亲和层析介质，并评价其纯化效果。方法 采用小鼠杂交瘤细胞融合技术及小鼠体内诱生法筛选并制备rhIFNα2b单克隆抗体（monoclonal antibody,McAb），经AT Protein A亲和层析纯化，12%还原型SDS-PAGE鉴定纯度，Western blot法鉴定McAb与rhIFNα2b原液及其聚合蛋白（rhIFNα2b原液于56℃热加速处理）的特异性反应。用筛选的McAb与CNBr-activated BestaroseTM4FF偶联1～4 h，紫外-可见分光光度法监测偶联液上清McAb蛋白浓度，12%还原型SDS-PAGE验证偶联介质抗体蛋白饱和程度，确定最佳偶联时间。将制备的McAb亲和层析介质装柱后，上样rhIFNα2b原液及经56℃热加速24 h的样品，15%非还原SDS-PAGE验证其纯化效果。结果 经杂交瘤制备和筛选，确定以4E2抗体作为偶联McAb，纯度＞ 95%。McAb 4E2与CNBr-activated BestaroseTM4FF偶联3 h后抗体蛋白浓度趋于平稳，预活化凝胶介质抗体蛋白吸附率约为30 mg/mL，凝胶介质偶联抗体蛋白量趋于饱和，为使偶联更加充分，确定最佳偶联时间为4 h。rhIFNα2b原液及其56℃热加速24 h样品可由McAb亲和柱层析有效吸附洗脱，并保持与McAb的结合活性。结论 本实验制备的rhIFNα2b单克隆抗体亲和层析介质，具有良好的纯化效果，为rhIFNα2b不同剂型比对样品的前处理提供了高效方法。
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