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目的
探讨瞬时受体电位M8(TRPM8)对人膀胱癌细胞T24细胞增殖和凋亡的影响。
方法利用荧光定量PCR检测人膀胱移行细胞癌细胞MGH-U1、T24、BIU-87以及EJ中TRPM8的表达水平；设计并合成靶向TRPM8的特异性shRNA，通过脂质体转染法转染TRPM8表达最高的人膀胱癌细胞T24以构建稳定低表达TRPM8细胞株，通过免疫印迹法和荧光定量PCR来验证shRNA的干扰效率；通过四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测干扰后细胞的增殖能力；通过流式细胞仪检测细胞凋亡情况；免疫印迹法检测PI3K、细胞周期素D1(Cyclin D1)以及Bcl-2的表达水平。
结果T24的TRPM8表达量在4株膀胱移行细胞癌细胞中最高；特异性靶向TRPM8的shRNA能够有效下调T24细胞中TRPM8的表达；特异性shRNA干扰组细胞较其他两组细胞增殖显著减慢(F＝64.73，P<0.01)；此外，干扰组的凋亡率显著高于空白组和对照组(F＝84.73，P<0.01)；最后，TRPM8干扰组细胞的PI3K、Cyclin D1以及Bcl-2蛋白的表达较空白组和对照组显著下调。
结论采用RNA干扰技术能够有效沉默T24细胞的TRPM8基因，并致使其细胞增殖能力下降以及细胞凋亡率升高，其中可能的机制为通过调节细胞因子PI3K来调控人膀胱移行细胞癌细胞的增殖和凋亡。TRPM8在膀胱癌的发生发展中起着较为重要作用，TRPM8可能成为治疗膀胱癌的新靶点。