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【摘要】 目的 探讨复发性口疮的发作与血清NO,NOS水平升高有关。方法 我们自1999~2000年,对收集的120例复发性口疮患者,50例健康献血者的血清中NO及NOS的水平进行了对照研究,研究复发性口疮患者血清一氧化氮(NO)及其合酶(NOS)与健康对照组的差异。结果 血清NO,NOS水平,复发性口疮发作期分别为(115±19.6)μmol/L、(42.27±5.58)μmol/L,复发性口疮间歇期分别为(81.26±12.15),(36.12± 7.40),健康对照组70.4±16.3 μmol/L、(32.8±7.8)μmol/L。复发性口疮发作期高于健康照组,tNO=2.736,pNO<0.005。tNOS=4.205,pNOS<0.005,差异有显著性。复发性口疮发作期高于间歇期,tNO=16.027,pNO<0.005。tNOS=7.269,pNOS<0.005,差异有显著性。结论 发性口疮发作期患者血清NO,NOS水平升高参与复发性口疮的发生。
【关键词】复发性口疮;一氧化氮;一氧化氮合酶
Clinual study on the relationship between recurrent aphtha and serum NO NOS
MA Wen bin,LI Nan,XIE Wen zhong,et al.Kaifeng Stomatological Hospital & Kaifeng Stomatological Prevention Institutes,Kaifeng 475000,China
【Abstract】 Objective To discuss that the outbreak of recurrent aphtha has relation to the rise of serum NO,NOS level.Methods From 1999 to 2000,we compared the serum NO and NOS levels of 120 recurrent aphthae patients to 50 healthy people,and analyzed the differences of the serum NO and NOS between the two groups.Results For the serum NO level and NOS level:In the outbreak phase,the figures are 115±19.6 μmol/L、42.27±5.58 μmol/L respectively; in the diapauses of recurrent aphtha,they are 81.26±12.15 ,36.12± 7.40 seperately; in the healthy contrast group,they are 70.4±16.3 μmol/L and 32.8±7.8 μmol/L.The indexes of the outbreak phase group are higher than those of the healthy contrast group,tNO=2.736,pNO<0.005.tNOS=4.205,pNOS<0.005,and they have significant differences.The indexes of the outbreak phase are also higher than those of the diapauses,tNO=16.027,pNO<0.005.tNOS=7.269,pNOS<0.005,notable differences exist.Conclusion Thus,the rise of serum NO,NOS level is involved in the occurrence of recurrent aphthae.
【Key words】 Recurrent aphtha; NO; NOS
一氧化氮(NO)是一种毒性极强、不稳定、易扩散、半衰期极短(3~5 s)化学性质极为活泼的自由基,在体内具有广泛的生物学特性,参与免疫、神经、消化、循环、骨骼等多种系统的生理及病理过程[1 4]。80年代末至今,NO的基础和临床研究涉及到包括口腔医学在内的医学免疫、神经、消化、循环各个领域[1 6]。研究表明:免疫、神经、消化、循环等与复发性口疮的发病有关[7 12],我们自1999~2000年,对收集的120例复发性口疮患者,50例健康献血者的血清中NO及NOS的水平进行了对照研究,现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 复发性口疮患者选择标准:①就诊前2~3 d末服相关药物,如抗生素类、消炎镇痛类、激素类、免疫抑制类药等,以避免此类药对血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)可能产生影响;②排除身体异常状态,如妊娠、贫血、消化性溃疡、急性感染、肿瘤等,对血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)可能产生的影响;③选取典型的复发性口疮患者,病史在1年以上,每月至少发生1次,至少2次以上发病史,每次疼痛在4 d以上,每次溃疡在1周以上,就诊时口疮发作在3 d之内。从1999~2000年门诊共收集复发性口疮患者120例,男70例,女50例,年龄15~60岁。
1.1.2 对照组选择标准 ①、②与复发性口疮患者相同 ③无复发性口疮及其他口腔粘膜病 ④健康献血者,经健康检查,无心、肝、肺、肾、胃异常,无慢性病史,无性病、艾滋病。从1999~2001年的献血者中选50例,男30例,女20例,年龄18~50岁。经统计学检查,二组的性别构成及平均年龄无统计学差异,具有可比性。
1.2 研究方法 两组均于清晨空腹采静脉血样,立即于4℃离心,分离出血清, 20℃低温保存,于1个月内待测。选用南京建成生物工程研究所的NO,NOS试剂盒,按其操作常规在RA 50半自动生化分析仪之540波长处比色,吸光度值与NO,NOS含量成正比,并计算求之。
2 结果
表1
发作期复发性口疮患者与健康对照者血清NO,NOS
水平的比较(x±s μmol/L)
nNONOS
复发性口疮120115.00±19.60**42.27±5.58**
健康对照5070.40±16.3032.80±7.80
注:**P<0.005 tNO=2.736 tNOS=4.205
表2
复发性口疮患者发作期于间歇期血清NO,NOS
水平的比较(x±sμmol/L)
发作期间歇期t p
NO115.00±19.6081.26±12.1516.027<0.01
NOS42.27±5.5836.12±7.407.269<0.01
血清NO,NOS水平复发性口疮患者发作期高于健康对照者,高于间歇期 。复发性口疮患者发作期血清NO,NOS水平升高与复发性口疮发作有关。
3 讨论
复发性口疮患者发作期血清NO,NOS浓度升高,我们认为其具有致病意义,原因有以下几点:
3.1 致痛作用[4] 复发性口疮的发作均伴疼痛,研究认为,NOS过度表达合成NO增多,是导致局部疼痛的重要因素。其致痛的途径有:①促进致痛物质如前列腺素(PG)、白三烯(LT)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)等释放;②抑制内源性抗痛物质活性,如生长抑素等;③直接作用于伤害感受器,最终引起局部组织疼痛。局部疼痛程度与其中NO的含量多少有关,高水平NO与疼痛具有重要关系。
3.2 局部微循环障碍[2 5] NO是一种强烈的扩血管因子,过量的NO打破了扩血管因子与缩血管因子之间的平衡,加速了炎症时的血流动力学的紊乱,如促进血管扩张,增强了血管的通透性和渗漏,造成局部红肿。大多数炎症相关物质与NO及NOS关系密切,直接或间接通过NO发挥作用,导致血管扩张、组织水肿、皮肤温度升高等炎症表现。
3.3 细胞毒作用
[2 4,13]:过量的NO可与靶细胞的金属蛋白相结合,直接介导细胞毒作用,其损伤机制有:①与线粒体呼吸链或DNA合成酶铁部分结合,导致亚硝基化,从而抑制线粒体合成酶Ⅰ和Ⅱ电子传递,抑制乌头酸酶、核糖酶和DNA限速酶活性,阻止细胞分裂;②对嘌呤和嘧啶碱基有脱氨基作用,导致DNA突变和断裂;③与超氧化物结合形成氧化亚硝酸盐,自发释放OH 、NO2 ,通过自由基链合成反应,导致含疏基蛋白和脂质过氧化,而促进炎症损伤靶细胞;④可引起3 磷酸甘油醛脱氢酶核糖基化,封闭糖酵解过程而阻断ATP产生,从而抑制细胞生长。
3.4 抑制免疫[3,5] NO在高浓度下对抗原提呈细胞活性和T细胞增殖起抑制作用。NO供体对人T细胞和人T细胞克隆分泌Th1、Th2、相关细胞因子都有抑制作用。
3.5 诱导促炎细胞生长因子的产生[2 4]在炎症反应中,NO作为活化的巨噬细胞释放的一种细胞毒效应因子,可诱导活化的炎细胞如巨噬细胞、白细胞等产生促炎细胞因子如TNF α 、IL 1等,并可通过正反馈产生更多的NO。NO介导和促进炎症的有力证据是在多种炎症性或免疫性动物实验模型中,NO浓度显著升高,抑制NO合成可使典型的炎症症状得到明显改善。
3.6 NO参与复发口疮的可能机制[1 4,7 13] 目前许多文献认为复发性口疮是微生物抗原、毒素或其他抗原物质引起的人体第Ⅲ型(免疫复合物型)和第Ⅳ型(细胞介导的迟发型)超敏反应。其中产生的细胞因子如:白介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)可激活组织中细胞,如巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、成纤细胞、神经细胞等过度表达iNOS(诱导型NOS)阳性,一旦表达,可较长时间、持续催化NO合成,产生大量NO发挥其毒性、炎性,免疫调节作用,直接或间接引起组织损伤。大量产生的NO可通过正反馈促进组织及炎细胞产生NO,导致破坏的持续发展。口腔黏膜溃疡是复发性口疮的主要表现,近来,动物试验证明:采用适量脉冲Nd:YAG激光照射口腔黏膜溃疡能有效降低组织中NO、NOS活性含量,能起到治疗口腔黏膜溃疡的作用[14]。因此认为局部iNOS活性增高产生大量NO产生毒性作用直接或间接的参与复发性口疮的发作。有研究表明:雷公藤多甙、皮质类固醇和环孢素能抑制iNOS表达。甲氨喋呤能通过抑制二氢叶酸还原酶,阻碍四氢生物喋呤的合成来影响NOS活性,非类固醇抗炎药如阿斯匹林和水杨酸钠一定程度上能抑制iNOS直接乙酰化抑制iNOS活性。四环素可降低巨噬细胞表达iNOS蛋白和抑制NO产生。这些药物又是治疗复发性口疮的传统药物。其治疗机理由此看来也与抑制NO产生有关。
3.7 展望 探讨NO,NOS与复发性口疮发病学的关系,从分子水平揭示复发性口疮的发病机制,无疑对其防治提供了新方法、新思路。但NOS有原生型NOS与诱导型NOS之分,原生型NOS存在于组织中主要起生理保护作用,而诱导型NOS主要与疾病有关,所以,开发研究针对选择性抑制iNOSmRNA和蛋白表达阳性和阻抑其合成途径的药物,将为复发性口疮的防治开辟一片新天地。
参考文献
[1] 陈桂珍,孙伟莲.牙周炎患者唾液一氧化氮的含量及其与牙周病指标相关性研究.华西口腔医学杂志,1999,17(2):140 141.
[2] 程越综述,彭彬审校.一氧化氮在牙髓组织中的生物学作用.国外医学口腔医学分册,1999,26(1):13 15.
[3] 周武庆编译,郑家润审校.一氧化氮在炎症和免疫调节中的作用.国外医学皮肤性病分册,1999,25(4):233 235.
[4] 许强综述,龙星审校.一氧化氮及其合酶在颞下颌关节紊乱病中的作用.国外医学口腔医学分册,2001,28(2):90 92.
[5] 曾曙光综述,陈伟良审校.一氧化氮与肿瘤的生物学行为及其在头颈肿瘤中的作用.口腔医学纵横杂志,2001,17(1):73 74.
[6] 严炎,刘正.内皮素与诱导型一氧化氮合酶的mRNA表达在牙髓炎中相关性研究.中华口腔医学杂志,1999,34(6):344 345.
[7] 李武修,高美华,孙树征.口腔免疫学.南海出版公司,1994:167 177.
[8] 韩桃娟.姜绍谆审阅.口腔疾病与免疫.人民卫生出版社,1987:106 113.
[9] 肖明振.口腔内科学.辽宁科学技术出版社,1996:369 373.
[10] 郑麟蕃,张震康.实用口腔科学.人民卫生出版社,1993:165 171.
[11] 张举之,樊明文.口腔内科学.人民卫生出版社,1995:356 362.
[12] 樊明文.口腔医学新进展.湖北科学技术出版社,1993:98 107.
[13] 邓长生,复冰主编.炎性肠病.人民卫生出版社,1998:108 110.
[14] 杨苏平,刘鲁川,刘娜.脉冲Nd:YAG激光对口腔黏膜溃疡组织中NO及NOS活性含量的影响.第三军医大学学报,2009,31(8):703 705.
【关键词】复发性口疮;一氧化氮;一氧化氮合酶
Clinual study on the relationship between recurrent aphtha and serum NO NOS
MA Wen bin,LI Nan,XIE Wen zhong,et al.Kaifeng Stomatological Hospital & Kaifeng Stomatological Prevention Institutes,Kaifeng 475000,China
【Abstract】 Objective To discuss that the outbreak of recurrent aphtha has relation to the rise of serum NO,NOS level.Methods From 1999 to 2000,we compared the serum NO and NOS levels of 120 recurrent aphthae patients to 50 healthy people,and analyzed the differences of the serum NO and NOS between the two groups.Results For the serum NO level and NOS level:In the outbreak phase,the figures are 115±19.6 μmol/L、42.27±5.58 μmol/L respectively; in the diapauses of recurrent aphtha,they are 81.26±12.15 ,36.12± 7.40 seperately; in the healthy contrast group,they are 70.4±16.3 μmol/L and 32.8±7.8 μmol/L.The indexes of the outbreak phase group are higher than those of the healthy contrast group,tNO=2.736,pNO<0.005.tNOS=4.205,pNOS<0.005,and they have significant differences.The indexes of the outbreak phase are also higher than those of the diapauses,tNO=16.027,pNO<0.005.tNOS=7.269,pNOS<0.005,notable differences exist.Conclusion Thus,the rise of serum NO,NOS level is involved in the occurrence of recurrent aphthae.
【Key words】 Recurrent aphtha; NO; NOS
一氧化氮(NO)是一种毒性极强、不稳定、易扩散、半衰期极短(3~5 s)化学性质极为活泼的自由基,在体内具有广泛的生物学特性,参与免疫、神经、消化、循环、骨骼等多种系统的生理及病理过程[1 4]。80年代末至今,NO的基础和临床研究涉及到包括口腔医学在内的医学免疫、神经、消化、循环各个领域[1 6]。研究表明:免疫、神经、消化、循环等与复发性口疮的发病有关[7 12],我们自1999~2000年,对收集的120例复发性口疮患者,50例健康献血者的血清中NO及NOS的水平进行了对照研究,现报告如下。
1 资料与方法
1.1 一般资料
1.1.1 复发性口疮患者选择标准:①就诊前2~3 d末服相关药物,如抗生素类、消炎镇痛类、激素类、免疫抑制类药等,以避免此类药对血清中一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)可能产生影响;②排除身体异常状态,如妊娠、贫血、消化性溃疡、急性感染、肿瘤等,对血清一氧化氮(NO)、一氧化氮合酶(NOS)可能产生的影响;③选取典型的复发性口疮患者,病史在1年以上,每月至少发生1次,至少2次以上发病史,每次疼痛在4 d以上,每次溃疡在1周以上,就诊时口疮发作在3 d之内。从1999~2000年门诊共收集复发性口疮患者120例,男70例,女50例,年龄15~60岁。
1.1.2 对照组选择标准 ①、②与复发性口疮患者相同 ③无复发性口疮及其他口腔粘膜病 ④健康献血者,经健康检查,无心、肝、肺、肾、胃异常,无慢性病史,无性病、艾滋病。从1999~2001年的献血者中选50例,男30例,女20例,年龄18~50岁。经统计学检查,二组的性别构成及平均年龄无统计学差异,具有可比性。
1.2 研究方法 两组均于清晨空腹采静脉血样,立即于4℃离心,分离出血清, 20℃低温保存,于1个月内待测。选用南京建成生物工程研究所的NO,NOS试剂盒,按其操作常规在RA 50半自动生化分析仪之540波长处比色,吸光度值与NO,NOS含量成正比,并计算求之。
2 结果
表1
发作期复发性口疮患者与健康对照者血清NO,NOS
水平的比较(x±s μmol/L)
nNONOS
复发性口疮120115.00±19.60**42.27±5.58**
健康对照5070.40±16.3032.80±7.80
注:**P<0.005 tNO=2.736 tNOS=4.205
表2
复发性口疮患者发作期于间歇期血清NO,NOS
水平的比较(x±sμmol/L)
发作期间歇期t p
NO115.00±19.6081.26±12.1516.027<0.01
NOS42.27±5.5836.12±7.407.269<0.01
血清NO,NOS水平复发性口疮患者发作期高于健康对照者,高于间歇期 。复发性口疮患者发作期血清NO,NOS水平升高与复发性口疮发作有关。
3 讨论
复发性口疮患者发作期血清NO,NOS浓度升高,我们认为其具有致病意义,原因有以下几点:
3.1 致痛作用[4] 复发性口疮的发作均伴疼痛,研究认为,NOS过度表达合成NO增多,是导致局部疼痛的重要因素。其致痛的途径有:①促进致痛物质如前列腺素(PG)、白三烯(LT)、P物质(SP)、降钙素基因相关肽(CGRP)等释放;②抑制内源性抗痛物质活性,如生长抑素等;③直接作用于伤害感受器,最终引起局部组织疼痛。局部疼痛程度与其中NO的含量多少有关,高水平NO与疼痛具有重要关系。
3.2 局部微循环障碍[2 5] NO是一种强烈的扩血管因子,过量的NO打破了扩血管因子与缩血管因子之间的平衡,加速了炎症时的血流动力学的紊乱,如促进血管扩张,增强了血管的通透性和渗漏,造成局部红肿。大多数炎症相关物质与NO及NOS关系密切,直接或间接通过NO发挥作用,导致血管扩张、组织水肿、皮肤温度升高等炎症表现。
3.3 细胞毒作用
[2 4,13]:过量的NO可与靶细胞的金属蛋白相结合,直接介导细胞毒作用,其损伤机制有:①与线粒体呼吸链或DNA合成酶铁部分结合,导致亚硝基化,从而抑制线粒体合成酶Ⅰ和Ⅱ电子传递,抑制乌头酸酶、核糖酶和DNA限速酶活性,阻止细胞分裂;②对嘌呤和嘧啶碱基有脱氨基作用,导致DNA突变和断裂;③与超氧化物结合形成氧化亚硝酸盐,自发释放OH 、NO2 ,通过自由基链合成反应,导致含疏基蛋白和脂质过氧化,而促进炎症损伤靶细胞;④可引起3 磷酸甘油醛脱氢酶核糖基化,封闭糖酵解过程而阻断ATP产生,从而抑制细胞生长。
3.4 抑制免疫[3,5] NO在高浓度下对抗原提呈细胞活性和T细胞增殖起抑制作用。NO供体对人T细胞和人T细胞克隆分泌Th1、Th2、相关细胞因子都有抑制作用。
3.5 诱导促炎细胞生长因子的产生[2 4]在炎症反应中,NO作为活化的巨噬细胞释放的一种细胞毒效应因子,可诱导活化的炎细胞如巨噬细胞、白细胞等产生促炎细胞因子如TNF α 、IL 1等,并可通过正反馈产生更多的NO。NO介导和促进炎症的有力证据是在多种炎症性或免疫性动物实验模型中,NO浓度显著升高,抑制NO合成可使典型的炎症症状得到明显改善。
3.6 NO参与复发口疮的可能机制[1 4,7 13] 目前许多文献认为复发性口疮是微生物抗原、毒素或其他抗原物质引起的人体第Ⅲ型(免疫复合物型)和第Ⅳ型(细胞介导的迟发型)超敏反应。其中产生的细胞因子如:白介素(IL)、干扰素(IFN)、肿瘤坏死因子(TNF)可激活组织中细胞,如巨噬细胞、中性粒细胞、肥大细胞、淋巴细胞、内皮细胞、血管平滑肌细胞、血小板、成纤细胞、神经细胞等过度表达iNOS(诱导型NOS)阳性,一旦表达,可较长时间、持续催化NO合成,产生大量NO发挥其毒性、炎性,免疫调节作用,直接或间接引起组织损伤。大量产生的NO可通过正反馈促进组织及炎细胞产生NO,导致破坏的持续发展。口腔黏膜溃疡是复发性口疮的主要表现,近来,动物试验证明:采用适量脉冲Nd:YAG激光照射口腔黏膜溃疡能有效降低组织中NO、NOS活性含量,能起到治疗口腔黏膜溃疡的作用[14]。因此认为局部iNOS活性增高产生大量NO产生毒性作用直接或间接的参与复发性口疮的发作。有研究表明:雷公藤多甙、皮质类固醇和环孢素能抑制iNOS表达。甲氨喋呤能通过抑制二氢叶酸还原酶,阻碍四氢生物喋呤的合成来影响NOS活性,非类固醇抗炎药如阿斯匹林和水杨酸钠一定程度上能抑制iNOS直接乙酰化抑制iNOS活性。四环素可降低巨噬细胞表达iNOS蛋白和抑制NO产生。这些药物又是治疗复发性口疮的传统药物。其治疗机理由此看来也与抑制NO产生有关。
3.7 展望 探讨NO,NOS与复发性口疮发病学的关系,从分子水平揭示复发性口疮的发病机制,无疑对其防治提供了新方法、新思路。但NOS有原生型NOS与诱导型NOS之分,原生型NOS存在于组织中主要起生理保护作用,而诱导型NOS主要与疾病有关,所以,开发研究针对选择性抑制iNOSmRNA和蛋白表达阳性和阻抑其合成途径的药物,将为复发性口疮的防治开辟一片新天地。
参考文献
[1] 陈桂珍,孙伟莲.牙周炎患者唾液一氧化氮的含量及其与牙周病指标相关性研究.华西口腔医学杂志,1999,17(2):140 141.
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[4] 许强综述,龙星审校.一氧化氮及其合酶在颞下颌关节紊乱病中的作用.国外医学口腔医学分册,2001,28(2):90 92.
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[11] 张举之,樊明文.口腔内科学.人民卫生出版社,1995:356 362.
[12] 樊明文.口腔医学新进展.湖北科学技术出版社,1993:98 107.
[13] 邓长生,复冰主编.炎性肠病.人民卫生出版社,1998:108 110.
[14] 杨苏平,刘鲁川,刘娜.脉冲Nd:YAG激光对口腔黏膜溃疡组织中NO及NOS活性含量的影响.第三军医大学学报,2009,31(8):703 705.