【摘 要】
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目的 探讨环状RNA 0000285(circ_0000285)对缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤的影响,并分析其机制是否与调控miR-625表达有关.方法 体外培养大鼠心肌细胞H9C2构建缺氧/复氧(H/R)细胞损伤模型.将H9C2细胞随机分为对照(Con)组、H/R组、H/R+si-NC组、H/R+si-circ_0000285组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-625组、H/R+si-circ_0000285+anti-miR-NC组、H/R+si-circ_0000285+anti-m
【机 构】
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110015 沈阳市,辽宁省金秋医院心内科;沈阳医学院临床教学实验中心
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目的 探讨环状RNA 0000285(circ_0000285)对缺氧/复氧诱导的心肌细胞氧化应激损伤的影响,并分析其机制是否与调控miR-625表达有关.方法 体外培养大鼠心肌细胞H9C2构建缺氧/复氧(H/R)细胞损伤模型.将H9C2细胞随机分为对照(Con)组、H/R组、H/R+si-NC组、H/R+si-circ_0000285组、H/R+miR-NC组、H/R+miR-625组、H/R+si-circ_0000285+anti-miR-NC组、H/R+si-circ_0000285+anti-miR-625组.实时定量PCR检测circ_0000285和miR-625表达量.流式细胞术检测H9C2细胞凋亡.免疫印迹法分析B细胞淋巴瘤-2蛋白(Bcl-2)和Bcl相关x蛋白(Bax)蛋白表达量.试剂盒检测丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性.双荧光素酶实验确定circ_0000285对miR-625的靶向作用.结果 H/R处理显著减低H9C2细胞中miR-625、Bcl-2表达量以及SOD和GSH-Px活性(P<0.05),增加circ_0000285和Bax表达量、MDA含量和细胞凋亡凋亡率(P<0.05).抑制circ_0000285表达或过表达miR-625显著增加H/R处理H9C2细胞中Bcl-2表达量以及SOD和GSH-Px活性(P<0.05),降低Bax表达量、MDA含量和细胞凋亡凋亡率(P<0.05).circ_0000285与miR-625直接结合,且circ_0000285负性调控miR-625表达(P<0.05).抑制miR-625表达可逆转抑制circ_0000285对H/R处理H9C2细胞氧化损伤和凋亡的保护作用(P<0.05).结论 干扰circ_0000285通过负调控miR-625表达能够减弱H/R诱导的心肌细胞凋亡和氧化应激损伤.
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