【摘 要】
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FactorC是鲎血细胞中的一种丝氨酸蛋白酶原 ,因其能以高亲和力结合脂多糖 (LPS) ,在医药产品的内毒素检测中起着重要的作用 .以往研究表明处于N端的 3个Sushi结构域对FactorC
【机 构】
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上海交通大学农业与生物技术学院,上海交通大学生命科学与技术学院,中国科学院上海生命科学研究院
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FactorC是鲎血细胞中的一种丝氨酸蛋白酶原 ,因其能以高亲和力结合脂多糖 (LPS) ,在医药产品的内毒素检测中起着重要的作用 .以往研究表明处于N端的 3个Sushi结构域对FactorC的LPS结合活性起着关键作用 ,而FactorCN端的其他 3个结构域 ,包括Cys rich结构域、EGF like结构域和Lectin like结构域对LPS结合活性的影响尚不清楚 .利用Bac to Bac昆虫细胞表达系统可使rFactorC及其 4个截短的片段rCES12 3L ,rCES12 3,rS12 3L和rS12 3获得表达 ,并且可采用亲和层析柱将这 5个重组表达产物纯化 .通过测定 5个重组表达产物的LPS结合活性及抑菌活性 ,可以确定FactorC的LPS结合位点位于S12 3区域 .尽管Cys rich结构域、EGF like结构域和Lectin like结构域中不存在LPS结合位点 ,但当这 3个结构域同时存在时 ,可提高FactorC或CES12 3L的LPS结合能力 ,因此rCES12 3L具有与rFactorC非常相近的LPS结合能力 .实验结果表明 ,rCES12 3L在昆虫细胞中的表达量比rFactorC高出 4倍 ,预示出rCES12 3L在医药领域的应用前景
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