【摘 要】
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目的 探讨鼠颊黏膜干细胞的体外分离和培养方法,以获得稳定生长的黏膜干细胞.方法 DispaseⅡ酶和Trypsin-EDTA两步法分离昆明小鼠颊黏膜上皮细胞,接种于以小鼠成纤维细胞NIH3
【机 构】
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中山大学光华口腔医学院口腔颌面外科,广州,510055
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目的 探讨鼠颊黏膜干细胞的体外分离和培养方法,以获得稳定生长的黏膜干细胞.方法 DispaseⅡ酶和Trypsin-EDTA两步法分离昆明小鼠颊黏膜上皮细胞,接种于以小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞为滋养层的培养板中.达尔伯克氏必需基本培养基(Dulbeccos minimum essential medium,DMEM)培养24 h后换用角质细胞无血清培养基(keratinocyte serum-free medium,K-SFM)继续培养,部分细胞72 h后行成骨、成脂诱导和改良型Kaplow碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色鉴定;部分细胞继续培养5 d后,消化转移至Ⅳ型胶原预包被的培养板中,加入黏膜干细胞培养基培养,观察细胞克隆形成和成骨、成脂诱导、兔抗鼠角蛋白和ALP染色结果.结果 初次分离的上皮细胞群83.96%处于G0或G1期,培养72 h后可见克隆样生长细胞,成骨、成脂诱导和ALP染色均呈阳性;细胞在Ⅳ型胶原包被的培养板上快速贴壁,呈圆形或卵圆形,胞体小,折光性强,克隆样生长,兔抗鼠角蛋白、ALP染色和成骨、成脂诱导均呈阳性.结论 运用滋养层细胞培养法获得大量干细胞样上皮细胞后,Ⅳ型胶原黏附结合K-SFM与NIH3T3培养上清液混合培养法可实现鼠颊黏膜干细胞的初步纯化和快速培养.
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