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【摘要】 目的 觀察抑癌基因PTEN在胃癌组织当中的表达,探讨其与胃癌发生的联系及其临床意义。方法 采用免疫组化方法检测抑癌基因PTEN在胃癌组织和正常胃黏膜中的表达。结果 PTEN在正常胃黏膜和胃癌中阳性率分别为100%,65.6%。PTEN表达与胃癌的分化程度高低、浸润深度、是否有淋巴结转移关系密切(P<0.05)。结论 PTEN的异常表达可为胃癌诊断和判断其生物学特性提供可靠的指标。
【关键词】胃癌;抑癌基因PTEN;表达;免疫组化
DOI:10.3760/cma.j.issn 1673-8799.2010.06.74
作者单位:261000山东省潍坊市妇幼保健院内科(张艳红 马香稳 许华强 张建武), 检验科(孙乃英);
潍坊市坊子区人民医院内科(吕晓军)
肿瘤是一种多基因异常导致的疾病,各种基因及其表达产物在肿瘤发生、发展过程中的作用及相互影响,一直是肿瘤分子机制研究的热点。PTEN是人类发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在维持细胞增殖、组织分化和凋亡平衡中起重要的作用,在许多肿瘤中表达突变或者缺失。本研究旨在用免疫组化SP法检测PTEN在胃癌组织中的表达,以探讨其与胃癌发生的病理联系及临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2008年2月至2010年2月在我院及潍坊市人民医院诊治的胃癌患者64例,其中男50例,女14例,年龄35~73岁。 曾经接受过手术治疗后复发者及经辅助治疗的患者,不包括在本次研究之内。并取距癌肿边缘10 cm以上邻近无增生的非肿瘤胃粘膜20例作对照。
1.2 方法 手术切除的胃癌组织、正常胃黏膜用10%中性缓冲福尔马林液中固定24 h,常规石蜡包埋。行4μm连续切片,每例取1张作HE染色,另取2张行免疫组织化学染色。采用SP法,一抗为鼠抗人PTEN单克隆抗体(福州迈新生物技术开发有限公司),SP免疫组织化学染色试剂盒(北京中杉生物技术有限公司),以已知阳性切片为阳性对照;以PBS代替一抗为阴性对照。染色过程按试剂盒说明操作。
1.3 结果判定
阳性:有棕黄色颗粒且染色强度高于背景的非特异性着色为阳性细胞。阴性:细胞浆无染色或与阴性对照一致。在10×40倍显微镜视野下将玻片分为5个区,每个区中连续观察100个细胞,平均个数作为计量值。根据相关文献,以阳性细胞数所占比例(5个高倍视野)分为:(-)为着色细胞<10% ;(+)为细胞着色数量在10%~25%之间:(++)细胞着色数量在25%~50%之间:(+++)为细胞着色数目>50%。
1.4 统计学方法 统计学分析采用χ2检验、及Spearman等级相关分析,以P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 胃癌和正常胃黏膜PTEN表达 PTEN在胃癌组织和正常胃黏膜的阳性率分别为65.6%和100%。正常胃黏膜显著高于胃癌组织(P<0.05)。
表1
胃癌组织PTEN蛋白的表达与临床
病理指标的关系(例)
临床病理指标例数PTEN蛋白阳性率(%)
组织正常组织2020100
癌组织644265.6
分化程度高/中分化393384.6
低分化251040
浸润深度侵及浆膜层24833.3
未及浆膜层403587.5
淋巴结转移无443988.6
有20420
2.2 胃癌PTEN表达与胃癌生物学行为关系选择分化程度,转移情况和浸润深度作为胃癌生物学行为的指标。本实验结果表明,高、中分化腺癌PTEN表达高于低分化腺癌表达(P<0.05),无淋巴结转移PTEN表达高于淋巴结转移表达(P<0.05),浸润深度为黏膜及黏膜下层,肌层和浆膜及浆膜外之间差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
PTEN/TEP1/MMAC1(第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失性基因)是位于人染色体10q23.3的抑癌基因,1997年由Li J等[3]3个研究小组几乎同时发现并分别命名,也是迄今为止发现的第1个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,其编码产物为403个氨基酸组成的蛋白质,与张力蛋白、辅助蛋白及酪氨酸磷酸酯酶具有同源性。
肿瘤抑制基因PTEN蛋白异常表达常见于多种恶性肿瘤组织中,但基因突变率在不同肿瘤类型中有较大差别[2,3]。肿瘤的发生是经过多步骤演变导致多基因突变累积的结果,近年来研究发现,抑癌基因功能丧失在胃癌的发生发展中具有十分重要的作用。PTEN通过蛋白磷酸酶的作用,使局灶粘连激酶(focal adhesion kinase,FAK)去磷酸化,下调FAK的活性,从而抑制了肿瘤细胞的浸润和转移[4,5]。本研究发现,胃癌组织中PTEN的表达总阳性率为65.6%,显著低于正常胃黏膜组织,表明胃癌组织中存在着PTEN基因的异常表达,提示FIEN在胃癌的发生中起着重要的作用。同时我们发现,PTEN在低分化腺癌的阳性表达率为40.0%,显著低于高中分化腺癌的表达率84.6%(P<0.05),推测PTEN蛋白下降或缺失使其抑制细胞不正常增殖分裂功能丧失,因而与胃癌的发展有关。本实验结果表明,伴有淋巴结转移的PTEN阳性表达率低于无淋巴结转移的PTEN表达率,两者间差异有统计学意义;随着浸润深度的加深,PTEN的阳性表达率逐渐降低,差异存在统计学意义(P<0.05),与文献报道一致[6]。
肿瘤的发生是极其复杂的分子事件,由于我们的样本量及所含信息有限,分析仅限于此,但是人们对PTEN与肿瘤发生发展的关系依然存在很多未知和争议。PTEN在胃癌发生发展中转录前及转录后的调节机制尚待进一步研究。 总之,我们的研究表明,PTEN表达与胃癌的发生、发展有关,可为胃癌的早期诊断、判断预后及指导治疗提供新的参考依据。
参考文献
[1] Li J,Yen C,Liaw D,et al. PTEN,a putative protein tyrosine phos-phatase gene mutated in human brain,breast,and prostate cancer.Science,1997,275:1943.
[2] SalvesenHB,Stefansson I,KrezsehmarEL,et al. Significance ofPTEN altertions in endometrial cancinoma:a population-based study ofmu-tations,promotermethylation and PTEN protein expression.Im JOnca,l 2004,25(6):1615-1623.
[3] Li J,Yen C,Liaw D,et al. PTEN a putative protein tymsine phospha-tase genemutated in human brain,breast,and prostate cancer.Science,1997,275(5308):1943-1947.
[4] Tannam M,Gu J,Matumoto K,et al. Inhibition 0f cell migration,spreading,and focal adhesions by tumor suppressor PTEN.Sci-ence,1998,280:1614-1617.
[6] Zhang LN,Yu Q,Wang LY,et al. The effects ofPTEN gene onmigra-tion and FAK phosphorylation ofSMMC-7721 human hepatocarcino-ma cell line.Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2003,35:161-166.
【关键词】胃癌;抑癌基因PTEN;表达;免疫组化
DOI:10.3760/cma.j.issn 1673-8799.2010.06.74
作者单位:261000山东省潍坊市妇幼保健院内科(张艳红 马香稳 许华强 张建武), 检验科(孙乃英);
潍坊市坊子区人民医院内科(吕晓军)
肿瘤是一种多基因异常导致的疾病,各种基因及其表达产物在肿瘤发生、发展过程中的作用及相互影响,一直是肿瘤分子机制研究的热点。PTEN是人类发现的第一个具有磷酸酶活性的抑癌基因,在维持细胞增殖、组织分化和凋亡平衡中起重要的作用,在许多肿瘤中表达突变或者缺失。本研究旨在用免疫组化SP法检测PTEN在胃癌组织中的表达,以探讨其与胃癌发生的病理联系及临床意义。
1 资料与方法
1.1 一般资料 选取2008年2月至2010年2月在我院及潍坊市人民医院诊治的胃癌患者64例,其中男50例,女14例,年龄35~73岁。 曾经接受过手术治疗后复发者及经辅助治疗的患者,不包括在本次研究之内。并取距癌肿边缘10 cm以上邻近无增生的非肿瘤胃粘膜20例作对照。
1.2 方法 手术切除的胃癌组织、正常胃黏膜用10%中性缓冲福尔马林液中固定24 h,常规石蜡包埋。行4μm连续切片,每例取1张作HE染色,另取2张行免疫组织化学染色。采用SP法,一抗为鼠抗人PTEN单克隆抗体(福州迈新生物技术开发有限公司),SP免疫组织化学染色试剂盒(北京中杉生物技术有限公司),以已知阳性切片为阳性对照;以PBS代替一抗为阴性对照。染色过程按试剂盒说明操作。
1.3 结果判定
阳性:有棕黄色颗粒且染色强度高于背景的非特异性着色为阳性细胞。阴性:细胞浆无染色或与阴性对照一致。在10×40倍显微镜视野下将玻片分为5个区,每个区中连续观察100个细胞,平均个数作为计量值。根据相关文献,以阳性细胞数所占比例(5个高倍视野)分为:(-)为着色细胞<10% ;(+)为细胞着色数量在10%~25%之间:(++)细胞着色数量在25%~50%之间:(+++)为细胞着色数目>50%。
1.4 统计学方法 统计学分析采用χ2检验、及Spearman等级相关分析,以P<0.05有统计学意义。
2 结果
2.1 胃癌和正常胃黏膜PTEN表达 PTEN在胃癌组织和正常胃黏膜的阳性率分别为65.6%和100%。正常胃黏膜显著高于胃癌组织(P<0.05)。
表1
胃癌组织PTEN蛋白的表达与临床
病理指标的关系(例)
临床病理指标例数PTEN蛋白阳性率(%)
组织正常组织2020100
癌组织644265.6
分化程度高/中分化393384.6
低分化251040
浸润深度侵及浆膜层24833.3
未及浆膜层403587.5
淋巴结转移无443988.6
有20420
2.2 胃癌PTEN表达与胃癌生物学行为关系选择分化程度,转移情况和浸润深度作为胃癌生物学行为的指标。本实验结果表明,高、中分化腺癌PTEN表达高于低分化腺癌表达(P<0.05),无淋巴结转移PTEN表达高于淋巴结转移表达(P<0.05),浸润深度为黏膜及黏膜下层,肌层和浆膜及浆膜外之间差异有统计学意义(P<0.05)。
3 讨论
PTEN/TEP1/MMAC1(第10号染色体上磷酸酶和张力蛋白同源缺失性基因)是位于人染色体10q23.3的抑癌基因,1997年由Li J等[3]3个研究小组几乎同时发现并分别命名,也是迄今为止发现的第1个具有双特异性磷酸酶活性的抑癌基因,其编码产物为403个氨基酸组成的蛋白质,与张力蛋白、辅助蛋白及酪氨酸磷酸酯酶具有同源性。
肿瘤抑制基因PTEN蛋白异常表达常见于多种恶性肿瘤组织中,但基因突变率在不同肿瘤类型中有较大差别[2,3]。肿瘤的发生是经过多步骤演变导致多基因突变累积的结果,近年来研究发现,抑癌基因功能丧失在胃癌的发生发展中具有十分重要的作用。PTEN通过蛋白磷酸酶的作用,使局灶粘连激酶(focal adhesion kinase,FAK)去磷酸化,下调FAK的活性,从而抑制了肿瘤细胞的浸润和转移[4,5]。本研究发现,胃癌组织中PTEN的表达总阳性率为65.6%,显著低于正常胃黏膜组织,表明胃癌组织中存在着PTEN基因的异常表达,提示FIEN在胃癌的发生中起着重要的作用。同时我们发现,PTEN在低分化腺癌的阳性表达率为40.0%,显著低于高中分化腺癌的表达率84.6%(P<0.05),推测PTEN蛋白下降或缺失使其抑制细胞不正常增殖分裂功能丧失,因而与胃癌的发展有关。本实验结果表明,伴有淋巴结转移的PTEN阳性表达率低于无淋巴结转移的PTEN表达率,两者间差异有统计学意义;随着浸润深度的加深,PTEN的阳性表达率逐渐降低,差异存在统计学意义(P<0.05),与文献报道一致[6]。
肿瘤的发生是极其复杂的分子事件,由于我们的样本量及所含信息有限,分析仅限于此,但是人们对PTEN与肿瘤发生发展的关系依然存在很多未知和争议。PTEN在胃癌发生发展中转录前及转录后的调节机制尚待进一步研究。 总之,我们的研究表明,PTEN表达与胃癌的发生、发展有关,可为胃癌的早期诊断、判断预后及指导治疗提供新的参考依据。
参考文献
[1] Li J,Yen C,Liaw D,et al. PTEN,a putative protein tyrosine phos-phatase gene mutated in human brain,breast,and prostate cancer.Science,1997,275:1943.
[2] SalvesenHB,Stefansson I,KrezsehmarEL,et al. Significance ofPTEN altertions in endometrial cancinoma:a population-based study ofmu-tations,promotermethylation and PTEN protein expression.Im JOnca,l 2004,25(6):1615-1623.
[3] Li J,Yen C,Liaw D,et al. PTEN a putative protein tymsine phospha-tase genemutated in human brain,breast,and prostate cancer.Science,1997,275(5308):1943-1947.
[4] Tannam M,Gu J,Matumoto K,et al. Inhibition 0f cell migration,spreading,and focal adhesions by tumor suppressor PTEN.Sci-ence,1998,280:1614-1617.
[6] Zhang LN,Yu Q,Wang LY,et al. The effects ofPTEN gene onmigra-tion and FAK phosphorylation ofSMMC-7721 human hepatocarcino-ma cell line.Acta Biochimica et Biophysica Sinica,2003,35:161-166.