【摘 要】
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目的 通过构建骨形成蛋白(BMP)重组腺病毒,为骨缺损的基因治疗提供可能.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法克隆出BMP2全长基因,构建重组腺病毒载体,DNA-磷酸钙共沉法将辅助质粒PJM17转染293细胞,同源重组构建出重组腺病毒.测滴度并用氯化铯梯度离心纯化备用.结果逆转录克隆出BMP2全长基因1.2kb,测序后连接于重组腺病毒载体,酶切鉴定后转染构建活病毒,再次感染293细胞扩增
【机 构】
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100037,北京,海军总医院骨外科,100037,北京,海军总医院骨外科,100037,北京,海军总医院骨外科,西安交通大学第一医院骨科,西安交通大学第一医院骨科,西安交通大学第一医院骨科
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目的 通过构建骨形成蛋白(BMP)重组腺病毒,为骨缺损的基因治疗提供可能.方法应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法克隆出BMP2全长基因,构建重组腺病毒载体,DNA-磷酸钙共沉法将辅助质粒PJM17转染293细胞,同源重组构建出重组腺病毒.测滴度并用氯化铯梯度离心纯化备用.结果逆转录克隆出BMP2全长基因1.2kb,测序后连接于重组腺病毒载体,酶切鉴定后转染构建活病毒,再次感染293细胞扩增,测滴度为×10E10 pfu/ml,并应用PCR法测定目的序列.结论 BMP2重组腺病毒的构建为骨缺损等疾病的基因治疗提供可能。
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