【摘 要】
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目的构建分泌表达α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-Cyclodextrin Glycosyltransferase,α-CGTase)的重组菌株,并利用该酶液制备AA-2G。方法经PCR扩增浸麻芽孢杆菌154基因组获得α
【机 构】
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济南市第四人民医院,山东省药学科学院山东省生物药物重点实验室山东省多糖类药物工程实验室多糖类药物发酵与精制国家地方联合工程实验室,山东福瑞达医药集团公司,
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目的构建分泌表达α-环糊精葡萄糖基转移酶(α-Cyclodextrin Glycosyltransferase,α-CGTase)的重组菌株,并利用该酶液制备AA-2G。方法经PCR扩增浸麻芽孢杆菌154基因组获得α-CGTase基因序列,将该基因序列和p ET26b载体分别经Nco I、Xho I双酶切后用T4 DNA连接酶连接,并转化大肠杆菌BL21。利用发酵培养基分泌表达α-CGTase,利用该酶和淀粉糊精、维生素C反应制备AA-2G,并进行制备条件优化。结果在大肠杆菌中实现了α-CGTase的胞外分泌表达,胞外环化酶活力达到120 U/m L,利用该酶的转糖基反应将淀粉糊精、维生素C转化为AA-2G,经HPLC检测正确。结论利用自制α-CGTase得到了AA-2G,通过制备条件优化AA-2G产量为17.46 g/L,转化率达到58.2%(mg/mg)。
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