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目的
观察siRNA干扰c-ski对视网膜色素上皮(RPE)细胞增生和周期的影响。
方法RPE细胞分为3组：空白对照组(转染时加脂质体)、阴性对照组(无关序列非特异性siRNA转染)和ski-siRNA转染组，另设阳性对照转染组(采用β-actin siRNA转染)。采用蛋白电泳检测转染24 h和48 h时的c-ski和Cyclin D1蛋白表达变化；比色法检测转染1、2、3、4 d时细胞的增生速率；流式细胞术检测转染24 h和48 h细胞周期的变化。
结果与空白对照组和阴性对照组相比，siRNA转染hRPE细胞增生在各个时间点均受到明显抑制(P<0.05)；3组间RPE细胞c-ski和Cyclin D1蛋白表达比较，差异有统计学意义(P<0.05)，与空白对照组和阴性对照组相比，c-ski siRNA转染组c-ski、Cyclin D1蛋白表达下降(P<0.05)。各组G0/G1、S和G2/M期RPE细胞比例比较，差异有统计学意义(P<0.01)，c-ski siRNA组G0/G1期细胞比例高于空白对照组和阴性对照组siRNA组(P<0.05)，S期细胞比例低于空白对照组和阴性对照组siRNA组(P<0.05)。
结论c-ski基因干扰可以有效地抑制RPE细胞增生，该分子机制可能是抑制RPE细胞G1期的调节子cyclin D，造成G0/G1期阻滞，不能进入S期。