【摘 要】
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目的 探讨联合干扰人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因和端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因在乳腺癌基因治疗中的协同效应.方法 构建表达小分子干扰RNA(siRNA)-hTERT和siRNA-TRF2的
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目的 探讨联合干扰人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因和端粒重复序列结合因子2(TRF2)基因在乳腺癌基因治疗中的协同效应.方法 构建表达小分子干扰RNA(siRNA)-hTERT和siRNA-TRF2的重组腺病毒载体rAd-hTERT和rAd-TRF2,单独或联合转染人乳腺癌MCF-7细胞.采用Western blot法检测MCF-7细胞中hTERT和TRF2蛋白的表达,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测MCF-7细胞的增殖抑制情况,采用流式细胞仪榆测MCF-7细胞的细胞周期变化,采用细胞平板克隆形成实验检测MCF-7细胞的克隆形成能力.结果 转染48 h后,PBS对照组、空载体对照组、阴性对照组、rAd-hTERT转染组、rAd-TRF2转染组以及rAd-hTERT和rAd-TRF2联合转染组乳腺癌MCF-7细胞中hTERT蛋白的相对表达量分别为1.00、0.94±0.02、0.95±0.04、0.18±0.04、0.95±0.01和0.18±0.04;TRF2蛋白的相对表达量分别为1.00、1.01±0.08、0.96±0.02、0.95±O.08、0.22±0.01 和0.26±0.02.单独转染rAd-hTERT或rAd-TRF2后,乳腺癌 MCF-7 细胞的增殖抑制率仅为54.6%和48.4%,有8.9%±1.2%和9.2%±2.3%的细胞进入分裂期,66.4%±1.5%和64.6%±1.9%的细胞阻滞于G_0+G_1期,细胞的克隆形成能力显著下降;联合转染rAd-hTERT和rAd-TRF2后,乳腺癌MCF-7细胞的增殖抑制率高达82.1%,进入分裂期的MCF-7细胞明显减少(为4.4%±1.2%),大量细胞阻滞于G_0+G_1期(为81.4%±1.3%),细胞的克隆形成能力下降更加明显.结论 联合干扰hTERT和TRF2 基因较单基因干扰可获得更有效的乳腺癌基因治疗效果.
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