肽核酸钳制PCR技术在结肠癌K-Ras基因突变检测中的优化

来源 :临床肿瘤学杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户：p_y112233

【摘要】

：

目的优化建立一种敏感、简便、稳定地检测结肠癌患者K-Ras基因突变的方法。方法构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型及突变型质粒,通过优化PCR及肽核酸与特异性引物

【作者】

：

刘晓静徐建明宋三泰师明磊张彦王洋

【机构】

：

北京军事医学科学院附属医院消化道肿瘤内科,军事医学科学院生物工程研究所

【出处】

：

临床肿瘤学杂志

【发表日期】

：

2012年2期

【关键词】

：

肽核酸结肠癌 K-RAS基因西妥昔单抗个体化治疗 Polyamide nucleic acid Colon cancer K-Ras gene Ce

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目的优化建立一种敏感、简便、稳定地检测结肠癌患者K-Ras基因突变的方法。方法构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型及突变型质粒,通过优化PCR及肽核酸与特异性引物的浓度关系,达到有效模板浓度低的样品K-Ras基因突变的检测。结果成功构建K-Ras基因第二外显子12、13密码子的野生型和突变型质粒。肽核酸钳制PCR条件优化包括：（1）最佳复性温度为58℃和60℃;（2）有效模板浓度为10^-6pg/μl;（3）引物浓度与肽核酸浓度的最佳比例为20∶1。在K-Ras突变型质粒与野生型质粒浓度比

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