【摘 要】
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木聚糖酶能催化木聚糖分解为低聚木糖和木单糖,对于木聚糖高效利用具有重要意义.该研究将黑曲霉(Aspergillus niger)AG11来源的 β-D-1,4内切木聚糖酶(β-D-1,4 endoxylanase,xynA)分泌表达于大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),并进行了表达条件优化和酶学性质研究.最终确定xynA最佳表达条件为:诱导剂(异丙基硫代半乳糖苷)浓度0.1 mmol/L、诱导温度20℃、诱导起始OD600值0.5.在该条件下,胞外xynA活力达到15.8 U/
【机 构】
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粮食发酵工艺与技术国家工程实验室(江南大学),江苏 无锡,214122;江南大学 生物工程学院,江苏 无锡,214122;江南大学 生物工程学院,江苏 无锡,214122
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木聚糖酶能催化木聚糖分解为低聚木糖和木单糖,对于木聚糖高效利用具有重要意义.该研究将黑曲霉(Aspergillus niger)AG11来源的 β-D-1,4内切木聚糖酶(β-D-1,4 endoxylanase,xynA)分泌表达于大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),并进行了表达条件优化和酶学性质研究.最终确定xynA最佳表达条件为:诱导剂(异丙基硫代半乳糖苷)浓度0.1 mmol/L、诱导温度20℃、诱导起始OD600值0.5.在该条件下,胞外xynA活力达到15.8 U/mL,较初始条件提高85.9％.重组xynA经镍柱纯化至单一条带后进行酶学性质分析.酶学性质分析表明,重组xynA比酶活力、最适反应温度及最适反应pH分别为175.1 U/mg、50℃和4.0.重组xynA在40℃半衰期为182 min,且在pH为2.0～9.0内孵育1 h保持在70％以上活性.以桦木木聚糖为底物,重组xy-nA的Km和kcat分别为3.45 g/L和58.51 s-1.研究结果为xynA优良突变体的筛选和在工业生产中的应用奠定了基础.
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