【摘 要】
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甲醇酵母(Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统.将人Cu,Zn-SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体pPIC3.5K,经转化his4缺陷型酵母GS115,用MD培养基及PCR方法筛选
【机 构】
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华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室,中国科学院上海生物化学研究所
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甲醇酵母(Pichia pastoris)是一种理想的真核蛋白高水平表达系统.将人Cu,Zn-SOD基因克隆到酵母整合型质粒载体pPIC3.5K,经转化his4缺陷型酵母GS115,用MD培养基及PCR方法筛选阳性转化子,并用含G418的YPD培养基筛选多拷贝转化子,经甲醇诱导表达.SDS-PAGE和蛋白质印迹杂交结果证实了表达产物为重组的人Cu,Zn-SOD,经计算机扫描分析,表达量占酵母可溶性蛋白的14%,所表达的人Cu,Zn-SOD比活可达每毫克蛋白质77U.
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