【摘 要】
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目的 观察固本清目方对实验性干性年龄相关性黄斑变性C57BL/6J小鼠的干预作用.方法 4月龄C57BL/6J小鼠40只,用慢性光照联合氢醌诱导建立视网膜变性模型.随机分为中药组、模型组,每组20只.中药组小鼠每日给予0.6 kg/kg固本清目方0.3 ml灌胃1次;模型组小鼠每日给予同体积蒸馏水灌胃1次.同时取正常未干预C57BL/6J小鼠20只为正常组,常规饲养作为对照.分别于干预14d及28 d采用视网膜电图(ERG)、HE染色观察各组小鼠视网膜功能和结构改变,TUNEL法观察视网膜细胞凋亡情况,免
【机 构】
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中国中医科学院眼科医院,北京100040
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目的 观察固本清目方对实验性干性年龄相关性黄斑变性C57BL/6J小鼠的干预作用.方法 4月龄C57BL/6J小鼠40只,用慢性光照联合氢醌诱导建立视网膜变性模型.随机分为中药组、模型组,每组20只.中药组小鼠每日给予0.6 kg/kg固本清目方0.3 ml灌胃1次;模型组小鼠每日给予同体积蒸馏水灌胃1次.同时取正常未干预C57BL/6J小鼠20只为正常组,常规饲养作为对照.分别于干预14d及28 d采用视网膜电图(ERG)、HE染色观察各组小鼠视网膜功能和结构改变,TUNEL法观察视网膜细胞凋亡情况,免疫荧光法检测Fas及其配体FasL的表达和分布,RT-PCR检测Fas、FasL mRNA的表达.结果 (1)ERG:在干预14 d和28 d时,①中药组与正常组比较,10Hz闪烁光反应(t14d=7.360,P=0.000;t28d=10.651,P=0.000)、最大反应(t28d=13.229,P=0.016)振幅较正常组降低,差异有统计学意义,而其他项目均无统计学意义(P＞0.05);②中药组与模型组比较,视杆细胞反应(t14d=2.937,P=0.022;t28d=4.687,P=0.002)、最大反应(t14d=3.153,P=0.016)、暗适应震荡电位(t14d=3.597,P=0.009;t28d=3.371,P=0.012)、视锥细胞反应(t14d=2.988,P=0.020;t28d=4.176,P=0.004)振幅均升高,差异均有统计学意义,而其他项目均无统计学意义(P＞0.05).(2)组织病理学:在干预14d和28 d时,HE染色显示,中药组小鼠视网膜色素上皮(RPE)细胞排列较规整,色素均匀分布于细胞内,Bruch膜结构相对完整,模型组小鼠RPE层呈现萎缩样改变;感光细胞计数比较,中药组较模型组显著增加(t14d=6.346,P=0.000;t28d=5.827,P=0.001),而与正常组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).(3)细胞凋亡:在14 d和28 d时,中药组细胞凋亡率较模型组均显著降低(t14a=2.714,P=0.030;t28d=3.231,P=0.014).(4)Fas和FasL:在14d和28 d时,Fas、FasL蛋白于正常组均有少量表达,主要分布在RPE细胞层;中药组表达范围同正常组相似,而模型组除RPE层外,在感光细胞内核层亦可见FasL阳性表达.RT-PCR结果显示,干预14d和28 d时,中药组与模型组比较Fas和FasLmRNA表达均降低(14 d:tFas=7.153,tFasL=8.372,均P=-0.000;28 d:tFas=11.204,tFasL=7.011,均P=0.000),差异均有统计学意义.而与正常组比较差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 固本清目方对实验性干性年龄相关性黄斑变性小鼠具有保护作用,其机制与抑制视网膜细胞凋亡密切相关.
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