【摘 要】
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目的 探讨RNA干扰Survivin基因表达对癜痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响,为瘢痕疙瘩的基因治疗提供实验依据.方法 构建靶向Survivin的siRNA表达质粒,利用Lipofectamine TM
【机 构】
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哈尔滨,哈尔滨医科大学附属第一医院整彤美容中心,黑龙江,150001大庆市龙南医院整形科;
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目的 探讨RNA干扰Survivin基因表达对癜痕疙瘩成纤维细胞增殖与凋亡的影响,为瘢痕疙瘩的基因治疗提供实验依据.方法 构建靶向Survivin的siRNA表达质粒,利用Lipofectamine TM 2000转染体外培养瘢痕疙瘩成纤维细胞;采用RT-PCR、Western blot技术检测成纤维细胞中Survivin基因的被干扰情况及Caspase-3基因的表达情况;利用MTT法、流式细胞仪检测成纤维细胞的增殖与凋亡情况.结果 靶向Survivin的序列特异件的siRNA对成纤维细胞中Survivin基因表达的抑制率:在mRNA水平为59.86%和82.57%,在蛋白质水平分别为48.76%和72.53%.Caspase-3基因的表达和活性显著增加(P＜0.01).转染靶向Survivin的RNAi表达质粒对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖的抑制较显著(P＜0.05).Annexin V-FITC/P1双染法显示,干扰Survivin基因表达后成纤维细胞的调亡率高于对照组(56.36%,P＜0.05).结论 所构建的靶向Survivin的RNAi质粒可有效地抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞中Survivin基因的表达,通过Survivin基因表达的下调激活Caspas-3基因活性,可显著抑制成纤维细胞的增殖并诱导其凋亡,为瘢痕疙瘩的基因治疗开辟一新途径.
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