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【摘 要】目的：了解莱州市腹泻症候群致病菌病原谱的构成，探讨主要病原菌对抗菌药物耐药性；方法：采集2012～2013年莱州市哨点医院肠道门诊腹泻患者的粪便标本.按莱州市腹泻症候群监测方案要求进行检测。结果：共检测445份腹泻患者标本，检出率为29.66%（132/445），其中检出致泻性弧菌61株，检出率为13.71%，包括副溶血性弧菌28株（45.90%）、气单胞菌24株（39.34%）、河弧菌5株（8.20%）、拟态弧菌、类志贺邻单胞各2株（3.28%），未检出霍乱弧菌和创伤弧菌。沙门氏菌、铜绿假单胞菌、海藻希瓦氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌检出率依次为8.32%（37/445）、2.92%（13/445）、2.25%（10/445）、1.35%（6/445）、0.67%（3/445）、0.45%（2/425）。男性检出率为28.29%（73/258）、女性为31.55%（59/187）（P>0.05），年龄组以31～40岁和41～50岁较高，均为38.46%，不同年龄组差异有统计学意义（P<0.05），8月、9月检出率高达为34.74%（33/95）和36.90%（31/84），不同月份差异有统计学意义（P<0.05）。致泻性弧菌对氨苄西林等青霉素类抗生素的耐药率较高。结论：莱州市腹泻患者由致泻性弧菌引起的比例最高，主要发生在夏秋季节， 临床治疗用药可用氨基糖苷类、喹诺酮类、β-内酰胺类等抗生素。
【关键词】腹泻；症候群； 抗菌药物；耐药性
【中图分类号】R181 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）05-3247-01
莱州市疾病预防控制中心自2010年起承担山东省腹泻症候群检测工作，每年5～10月份对哨点医院肠道门诊腹泻病例采集粪便样本，进行细菌分离鉴定和药物敏感试验。为了解莱州市腹泻症候群的构成及耐药性变迁，为今后长期耐药性监测和防控由细菌引起的腹泻病提供依据，指导临床合理用药，我们对2012～2013年莱州市腹泻症候群检测结果进行分析。
1 材料与方法
1.1 材料与标本处理 标本来自2012～2013年莱州市6个乡镇医院监测点肠道门诊，选择每日腹泻≥3次，且具有大便性状异常（呈稀便、水样便、粘脓便或脓血便等）病例。监测点肠道门诊用5支棉签采集粪便标本于Cary-Blair培养基，4h内送到莱州市疾病预防控制中心进行致泻大肠杆菌、致泻性弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌、气单胞菌、类志贺邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、铜绿假单胞菌等检测，培养基山东省疾病预防控制中心细菌所统一配发，运送培养基和各种增菌液为青岛高科园海博生物技术有限公司生产，分离用麦康凯琼脂（Mac）、SS、XLD、硫代硫酸盐柠檬酸钠胆盐蔗糖琼脂（TCBS）、庆大琼脂、科玛嘉弧菌显色培养基均为北京陆桥技术有限责任公司产品、小肠结肠炎耶尔森氏菌培养基为BD公司生产。
1.2 方法
1.2.1在装有标本的培养基中，取一棉签标本于改良磷酸盐缓冲液中，4℃增菌20天。另取棉签标本，分别放入碱性蛋白胨水（APW），mEC和SBG增菌液中， 37℃分别增菌培养6h、14 h和16 h。取第五支棉签直接分离Mac、SS、XLD平板。
1.2.2 分离培养 于磷酸盐缓冲液中接种耶尔森氏菌选择性平板和Mac培养基，25±1℃培养24 h。自APW增菌液，选择生长最茂盛的培养基表面或菌膜下表层，取2～3滴加入霍乱01、0139胶体金试纸中，同时划线接种（TCBS）、庆大琼脂、科玛嘉弧菌显色培养基，37℃培養12～18h后，从庆大琼脂上选择5～10个可疑菌落做霍乱弧菌血清凝集实验；从TCBS琼脂、科玛嘉弧菌显色培养基上选择5～10个单菌落，做其他弧菌鉴定实验；从Mac、SS、XLD平板上选择单菌落做气单胞菌和类志贺邻单胞菌和肠道菌的鉴定实验。mECEC和SBG增菌液分别分离0157和沙门氏显色培养基，36±1℃培养24 h。
1.2.3 生化检测 自TCBS、科玛嘉弧菌显色培养基、Mac、SS、XLD和耶尔森氏菌等分离平板上挑取可疑菌株接种（KIA/MIU）、做氧化酶实验进行生化初筛，保存于半固体中进一步集中筛选【1】，菌株经VITEK 2 COMPACT（法国BioMérieux公司）生化系统鉴定。
1.2.4 抗菌药物敏感性检测依据美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的抗菌药物敏感性试验执行标准M100-S20，利用96孔板微量肉汤稀释法对多西环素、诺氟沙星、卡那霉素、氯霉素、复方新诺明、呋喃妥因、环丙沙星、氨苄西林、头孢曲松、庆大霉素、阿米卡星及阿奇霉素12种不同类别的常用抗生素进行试验及结果判读，质控菌株为大肠埃希氏菌ATCC25922。
2 结果
2.1 各菌种检出率
2012-2013年检测445份腹泻患者标本，阳性检出率为29.66%（132/445），其中检出致泻性弧菌61株，检出率为13.71%，包括副溶血性弧菌28株（45.90%）、气单胞菌24株（39.34%）、河弧菌5株（8.20%）、拟态弧菌、类志贺邻单胞各2株（3.28%），未检出霍乱弧菌和创伤弧菌。沙门氏菌、铜绿假单胞菌、海藻希瓦氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌检出率依次为8.32%（37/445）、2.92%（13/445）、2.25%（10/445）、1.35%（6/445）、0.67%（3/445）、0.45%（2/425）
2.2不同月份致病菌检出情况 病原菌检出率， 5月为17.07%（7/41），6月为25.00%（19/76），7月为31.03%（27/87），8月为34.74%（33/95），9月为36.90%（31/84），10月为24.19%（15/62），差异有统计学意义（χ2=8.14，P<0.05）， 2.3不同人群病原菌检出情况 病原菌检出率，男性为28.29%（73/258）、女性为31.55%（59/187），差异无统计学意义（χ2 =0.68，P>0.05）；不同年龄组的检出率为：2天～10岁24.07%（26/108），11～20岁27.27%（12/44），21～30岁22.95%（14/61），31～40岁38.46%（15/39），41～50岁38.46%（20/52），51～86岁26.32%（745/141），各年龄组差异有统计学意义（χ2 =5.69，P>0.05）。
2.4药敏结果 用12种抗生素对61株致泻性弧菌菌株进行药敏试验，不同菌属的菌株对抗生素耐药率不同，其中拟态弧菌、河弧菌对12种抗生素均敏感；类志贺邻单胞仅对氨苄西林耐药，对其他11种抗生素均敏感；副溶血弧菌对氨苄西林耐药率为17.90%；气单胞菌对呋喃妥因、庆大霉素、阿米卡星、阿奇霉素4种抗生素均敏感，对氨苄西林耐药率为91.67%（22/24）。嗜水气单胞菌中有2株对6类抗生素耐药。
3 讨论
2012-2013年莱州市腹泻症候群构成为副溶血性弧菌、气单胞菌、河弧菌、拟态弧菌、类志贺邻单胞，沙门氏菌、铜绿假单胞菌、海藻希瓦氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌，其中致泻性弧菌61株，多于其他病原菌。致泻性弧菌感染高峰与水产品携带高峰一致，与疾病发生高峰的流行规律吻合【2】，莱州市人群中不同性别检出率无差异，原因是该市市民历来有喜食水产品的习惯，致泻性弧菌感染的机会大致均等。带菌水产品是诱发致泻性弧菌疾病的原因食品【3】，因此，市民在食用时应煮熟、煮透，如果水产品生食或加工不當，易造成疾病的发生，故除加强监测外，对市民相关知识宣传和培训，以减少致泻性弧菌引起的食源性疾病的发生，保障居民的身体健康具有重要意义。
抗菌药物的广泛使用，虽然为临床治疗提供了方便，同时也导致细菌的耐药性问题在不断增加。检测显示，气单胞菌株对氨苄西林耐药性最高达（91.67%），而对其他抗生素有较高敏感性，低于司力娜【4】耐药结果100%。说明致泻性弧菌的耐药性是动态变化的，耐药性差异可能与地区不同、菌株来源不同以及医院使用抗生素的习惯及经验用药的种类等因素综合所致。有文献报道【5】，嗜水气单胞菌能生成生物被摸（Biofilm，BF），形成耐药屏障，故氨苄西林的高耐药性提示应谨慎、合理、有效使用抗生素，并加强对水产品使用抗生素的限制，若长期超量使用抗菌药物，势必造成诸如，细菌耐药基因转移、抗药性增加等严重后果。应加强检测，密切注意细菌对抗菌药物的耐药变迁，指导临床合理使用抗菌药物，为预防和细菌性菌腹泻提供依据。
参考文献：
[1] 周伟艳，徐景野，章丹阳，等.应用筛检方法快速检测小海产品中副溶血性弧菌[J].中国卫生检验杂志，2011，21（3）：639-641.
[2] 邱维丰.宁波市2000-2006年食物中毒分析[J].中国农村卫生事业管理，2008， 28（1）：57-58.
[3] 李映霞，吴琪，黄芳，等.广州市海珠区水产品副溶血性弧菌污染状况调查分析中国卫生检验杂志，2012，21（5）：1175-1176.
[4] 司力娜，李绍戊，王荻，等.东北三省15株致病性嗜水气单胞菌分离株的药敏实验分析[J].江西农业大学学报，2011，33（4）： 786-790.
[5] Costerton J W， Stewart P S， Greenberg E P， et al，Bacteralbiofilm： a common cause of persistent infections[J].Science，1999，34（284）：1318-1322.
【关键词】腹泻；症候群； 抗菌药物；耐药性
【中图分类号】R181 【文献标识码】A 【文章编号】1004-7484（2014）05-3247-01
莱州市疾病预防控制中心自2010年起承担山东省腹泻症候群检测工作，每年5～10月份对哨点医院肠道门诊腹泻病例采集粪便样本，进行细菌分离鉴定和药物敏感试验。为了解莱州市腹泻症候群的构成及耐药性变迁，为今后长期耐药性监测和防控由细菌引起的腹泻病提供依据，指导临床合理用药，我们对2012～2013年莱州市腹泻症候群检测结果进行分析。
1 材料与方法
1.1 材料与标本处理 标本来自2012～2013年莱州市6个乡镇医院监测点肠道门诊，选择每日腹泻≥3次，且具有大便性状异常（呈稀便、水样便、粘脓便或脓血便等）病例。监测点肠道门诊用5支棉签采集粪便标本于Cary-Blair培养基，4h内送到莱州市疾病预防控制中心进行致泻大肠杆菌、致泻性弧菌、沙门氏菌、志贺氏菌、气单胞菌、类志贺邻单胞菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌、铜绿假单胞菌等检测，培养基山东省疾病预防控制中心细菌所统一配发，运送培养基和各种增菌液为青岛高科园海博生物技术有限公司生产，分离用麦康凯琼脂（Mac）、SS、XLD、硫代硫酸盐柠檬酸钠胆盐蔗糖琼脂（TCBS）、庆大琼脂、科玛嘉弧菌显色培养基均为北京陆桥技术有限责任公司产品、小肠结肠炎耶尔森氏菌培养基为BD公司生产。
1.2 方法
1.2.1在装有标本的培养基中，取一棉签标本于改良磷酸盐缓冲液中，4℃增菌20天。另取棉签标本，分别放入碱性蛋白胨水（APW），mEC和SBG增菌液中， 37℃分别增菌培养6h、14 h和16 h。取第五支棉签直接分离Mac、SS、XLD平板。
1.2.2 分离培养 于磷酸盐缓冲液中接种耶尔森氏菌选择性平板和Mac培养基，25±1℃培养24 h。自APW增菌液，选择生长最茂盛的培养基表面或菌膜下表层，取2～3滴加入霍乱01、0139胶体金试纸中，同时划线接种（TCBS）、庆大琼脂、科玛嘉弧菌显色培养基，37℃培養12～18h后，从庆大琼脂上选择5～10个可疑菌落做霍乱弧菌血清凝集实验；从TCBS琼脂、科玛嘉弧菌显色培养基上选择5～10个单菌落，做其他弧菌鉴定实验；从Mac、SS、XLD平板上选择单菌落做气单胞菌和类志贺邻单胞菌和肠道菌的鉴定实验。mECEC和SBG增菌液分别分离0157和沙门氏显色培养基，36±1℃培养24 h。
1.2.3 生化检测 自TCBS、科玛嘉弧菌显色培养基、Mac、SS、XLD和耶尔森氏菌等分离平板上挑取可疑菌株接种（KIA/MIU）、做氧化酶实验进行生化初筛，保存于半固体中进一步集中筛选【1】，菌株经VITEK 2 COMPACT（法国BioMérieux公司）生化系统鉴定。
1.2.4 抗菌药物敏感性检测依据美国临床和实验室标准协会（CLSI）推荐的抗菌药物敏感性试验执行标准M100-S20，利用96孔板微量肉汤稀释法对多西环素、诺氟沙星、卡那霉素、氯霉素、复方新诺明、呋喃妥因、环丙沙星、氨苄西林、头孢曲松、庆大霉素、阿米卡星及阿奇霉素12种不同类别的常用抗生素进行试验及结果判读，质控菌株为大肠埃希氏菌ATCC25922。
2 结果
2.1 各菌种检出率
2012-2013年检测445份腹泻患者标本，阳性检出率为29.66%（132/445），其中检出致泻性弧菌61株，检出率为13.71%，包括副溶血性弧菌28株（45.90%）、气单胞菌24株（39.34%）、河弧菌5株（8.20%）、拟态弧菌、类志贺邻单胞各2株（3.28%），未检出霍乱弧菌和创伤弧菌。沙门氏菌、铜绿假单胞菌、海藻希瓦氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌检出率依次为8.32%（37/445）、2.92%（13/445）、2.25%（10/445）、1.35%（6/445）、0.67%（3/445）、0.45%（2/425）
2.2不同月份致病菌检出情况 病原菌检出率， 5月为17.07%（7/41），6月为25.00%（19/76），7月为31.03%（27/87），8月为34.74%（33/95），9月为36.90%（31/84），10月为24.19%（15/62），差异有统计学意义（χ2=8.14，P<0.05）， 2.3不同人群病原菌检出情况 病原菌检出率，男性为28.29%（73/258）、女性为31.55%（59/187），差异无统计学意义（χ2 =0.68，P>0.05）；不同年龄组的检出率为：2天～10岁24.07%（26/108），11～20岁27.27%（12/44），21～30岁22.95%（14/61），31～40岁38.46%（15/39），41～50岁38.46%（20/52），51～86岁26.32%（745/141），各年龄组差异有统计学意义（χ2 =5.69，P>0.05）。
2.4药敏结果 用12种抗生素对61株致泻性弧菌菌株进行药敏试验，不同菌属的菌株对抗生素耐药率不同，其中拟态弧菌、河弧菌对12种抗生素均敏感；类志贺邻单胞仅对氨苄西林耐药，对其他11种抗生素均敏感；副溶血弧菌对氨苄西林耐药率为17.90%；气单胞菌对呋喃妥因、庆大霉素、阿米卡星、阿奇霉素4种抗生素均敏感，对氨苄西林耐药率为91.67%（22/24）。嗜水气单胞菌中有2株对6类抗生素耐药。
3 讨论
2012-2013年莱州市腹泻症候群构成为副溶血性弧菌、气单胞菌、河弧菌、拟态弧菌、类志贺邻单胞，沙门氏菌、铜绿假单胞菌、海藻希瓦氏菌、志贺氏菌、致病性大肠杆菌、小肠结肠炎耶尔森氏菌，其中致泻性弧菌61株，多于其他病原菌。致泻性弧菌感染高峰与水产品携带高峰一致，与疾病发生高峰的流行规律吻合【2】，莱州市人群中不同性别检出率无差异，原因是该市市民历来有喜食水产品的习惯，致泻性弧菌感染的机会大致均等。带菌水产品是诱发致泻性弧菌疾病的原因食品【3】，因此，市民在食用时应煮熟、煮透，如果水产品生食或加工不當，易造成疾病的发生，故除加强监测外，对市民相关知识宣传和培训，以减少致泻性弧菌引起的食源性疾病的发生，保障居民的身体健康具有重要意义。
抗菌药物的广泛使用，虽然为临床治疗提供了方便，同时也导致细菌的耐药性问题在不断增加。检测显示，气单胞菌株对氨苄西林耐药性最高达（91.67%），而对其他抗生素有较高敏感性，低于司力娜【4】耐药结果100%。说明致泻性弧菌的耐药性是动态变化的，耐药性差异可能与地区不同、菌株来源不同以及医院使用抗生素的习惯及经验用药的种类等因素综合所致。有文献报道【5】，嗜水气单胞菌能生成生物被摸（Biofilm，BF），形成耐药屏障，故氨苄西林的高耐药性提示应谨慎、合理、有效使用抗生素，并加强对水产品使用抗生素的限制，若长期超量使用抗菌药物，势必造成诸如，细菌耐药基因转移、抗药性增加等严重后果。应加强检测，密切注意细菌对抗菌药物的耐药变迁，指导临床合理使用抗菌药物，为预防和细菌性菌腹泻提供依据。
参考文献：
[1] 周伟艳，徐景野，章丹阳，等.应用筛检方法快速检测小海产品中副溶血性弧菌[J].中国卫生检验杂志，2011，21（3）：639-641.
[2] 邱维丰.宁波市2000-2006年食物中毒分析[J].中国农村卫生事业管理，2008， 28（1）：57-58.
[3] 李映霞，吴琪，黄芳，等.广州市海珠区水产品副溶血性弧菌污染状况调查分析中国卫生检验杂志，2012，21（5）：1175-1176.
[4] 司力娜，李绍戊，王荻，等.东北三省15株致病性嗜水气单胞菌分离株的药敏实验分析[J].江西农业大学学报，2011，33（4）： 786-790.
[5] Costerton J W， Stewart P S， Greenberg E P， et al，Bacteralbiofilm： a common cause of persistent infections[J].Science，1999，34（284）：1318-1322.