目的:建立了同时测定富马酸替诺福韦二吡呋酯原料药中13个已知杂质的方法。方法:采用反相高效液相色谱法,以苯基硅烷键合硅胶为填充剂（Inertsil Phenyl-3,250 mm×4. 6 mm,5μm）;流动相A为0. 05 mol·L^-1醋酸铵缓冲液（pH 5. 5）-甲醇（85∶15）,流动相B为0. 05 mol·L^-1醋酸铵缓冲液（pH 5. 5）-甲醇（15∶85）,进行梯度洗脱;检测波长为260 nm;流速为1. 0 m L·min^-1;柱温为30℃;进样量为10μL。测定13个已知杂质的线性方程,以斜率计算各杂质相对于替诺福韦二吡呋酯的校正因子,用相对保留时间定位,并完成方法学验证。结果:替诺福韦二吡呋酯与相邻杂质及各已知杂质之间的分离度均大于1. 5。采用所建立的加校正因子的自身对照法和杂质对照品外标法,对3批样品中有关物质进行检查,2种方法杂质测定结果一致。结论:该方法的专属性、线性等良好,可采用加校正因子的主成分自身对照法对本品的有关物质进行检测。