【摘 要】
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[目的]建立台兰稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系.[方法]用改良的CTAB法提取叶片的基因组DNA,并对影响台兰ISSR-PCR反应体系的主要成分进行筛选和优化.[结果]台兰的ISSR-P
【机 构】
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临沧师范高等专科学校数理系,云南临沧677000南昌大学生命科学与食品工程学院,江西南昌330031;南昌大学生命科学与食品工程学院,江西南昌,330031;临沧师范高等专科学校数理系,云南临沧,67
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[目的]建立台兰稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系.[方法]用改良的CTAB法提取叶片的基因组DNA,并对影响台兰ISSR-PCR反应体系的主要成分进行筛选和优化.[结果]台兰的ISSR-PCR优化反应体系为:25μl PCR反应体积中,2.5μl10×PCRbuffer,2.0mmol/L MgCl2,100 ng模板DNA,0.5 mmol/L dNTPs,0.22 U Taq DNA聚合酶,0.4 μmoL/L引物,15.78μl双蒸水.最佳扩增程序为:94℃预变性5min,然后进行40个循环:94℃变性30s,复性温度根据各引物的TM值略低1～2℃,30s,72℃延伸50s,循环结束后72℃延伸7 min.[结论]台兰ISSR-PCR优化反应体系为今后利用ISSR技术进行台兰种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础.
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