观察烟草烟雾提取物(CSE)对肺动脉内皮细胞(HPAEC)衰老的影响以及细胞衰老相关分泌表型(SASP)对肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)的增殖和迁移效应。
方法对HPAEC给予不同浓度的CSE，分别于0、6、12、24、48和72 h观察并使用CCK8法检测细胞活性，流式细胞术检测细胞的增殖情况，利用β-半乳糖苷酶(SA-β-gal)衰老染色对衰老细胞进行拍照染色计数，Western blot法检测衰老相关蛋白的表达情况，免疫荧光检测细胞中蛋白的表达量，实时PCR检测衰老相关基因的表达，酶联免疫吸附试验(ELISA)检测分泌的细胞因子浓度，Transwell检测HPASMC的迁移情况。
结果与0 h时比较，48 h时细胞活性明显降低，吸光度值为(1.8±0.1)，差异有统计学意义(P<0.05)；72 h时细胞活性(1.8±0.1)下降更加明显(P<0.01)。流式细胞术检测细胞周期发现CSE刺激后S期细胞(14.1±1.2)数量较前(28.5±1.8)明显下降，细胞周期阻滞较为明显且具有统计学意义(P<0.01)。细胞衰老相关分泌表型(SASP)的含量不断升高，其中MCP-1含量0 h时为(177±39)，48 h时为(460±43)，72 h时为(609±64)；TGF-β1含量0 h时为(121±18)，48 h时为(413±32)，72 h时为(606±67)；bFGF含量0 h时为(123±17)，48 h时为(291±13)，72 h时为(471±43)，差异均有统计学意义(均P<0.05)。Western blot法可见HPAEC中衰老相关蛋白p53或p21随着CSE刺激浓度和刺激时间的增加表达也逐渐增高(P<0.05)，SA-β-gal衰老染色可见随着时间延长视野内衰老细胞的数量明显增加。免疫荧光和Transwell小室实验图像均可验证细胞增殖情况。
结论CSE可诱导HPAEC发生衰老并能够使平滑肌细胞发生迁移。