天山堇菜总黄酮抗流感病毒作用及机制研究

来源 :中国中西医结合杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zhym821211
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目的 研究天山堇菜总黄酮(TFVM)的体内外抗流感病毒作用及其机制.方法 体外实验采用细胞病变效应(CPE)法观察TFVM对流感病毒A/FM/1/1947 (H1N1)致犬肾细胞(MDCK)病变的影响;设置细胞对照组,病毒感染组,阳性药金刚烷胺(AH)对照药组(10μmol/L),TFVM 100、50、25μg/mL 3个浓度组,以H1N1分别感染MDCK和人髓系白血病单核细胞(THP-1),Western Blot法检测基质蛋白2 (M2)、非结构蛋白(NS1)蛋白表达,检测THP-1细胞中p65蛋白表达及核转位;鸡血球细胞凝集实验检测TFVM对血凝素(HA)的抑制作用,荧光法检测神经氨酸酶(NA)活性.体内实验将小鼠随机分为病毒感染对照组,阳性药达菲(11.375 mg/kg)组,TFVM高、低剂量(0.4、0.2 g/kg)组,以流感病毒鼠肺适应株FM1感染小鼠建立病毒性肺炎模型,取小鼠肺组织研磨液接种MDCK细胞,CPE法观察对小鼠肺组织病毒增殖量的影响;qRT-PCR检测M2蛋白及肺组织中炎症因子TNF-α、IL-1 β、IL-6、IL-10、干扰素诱导蛋白10 (IP-10) mRNA表达水平.结果 TFVM明显抑制流感病毒致MDCK细胞病变,其IC50为79.1μg/mL;其100μg/mL浓度对MDCK和THP-1细胞中流感病毒M2、NS1蛋白表达均有明显抑制作用;TFVM还可抑制THP-1细胞内p65蛋白表达及其核转位.TFVM对流感病毒的两个膜蛋白NA和HA功能无明显影响;TFVM以0.2、0.4 g/kg剂量给药可明显降低流感病毒感染小鼠肺组织内病毒载量(P<0.05,P<0.01),并降低炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10、IP-10 mRNA表达水平(P<0.05,P<0.01),在一定程度上能降低M2 mRNA表达水平(P>0.05).结论 TFVM在体内外均有明显的抗流感病毒作用,其机制可能是通过抑制M2蛋白和NS1蛋白表达而直接抑制流感病毒的复制;还可能通过抑制宿主细胞内p65蛋白表达及其核转位,从而干预NF-κB信号通路下游炎症因子的表达,发挥间接抗病毒作用.
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