可溶性TCR蛋白复合物原核表达与纯化的研究

来源 :药物生物技术 | 被引量 : 0次 | 上传用户:cmudh134
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
T细胞受体(T cell receptor,TCR)是通过二硫键连接α链和β链或者γ链和δ链的异二聚体蛋白复合物.本研究使用原核系统体外分别表达两条单链,摸索并确定快速获得一定量的TCR蛋白的复性条件,实验发现TRA、TRB蛋白变性液按照2∶1 (mg/mg)的比例混合均匀后缓慢滴加到4℃搅拌的复性液(50 mmol/L Tris、0.4 mol/L L-精氨酸、5 mol/L脲、5mmol/L EDTA、10 mmol/L还原型谷胱甘肽、2mmol/L氧化型谷胱甘肽,pH =7.6)中复性24h,使用HitrapTM CaptoTM Q初步分离纯化,去除部分不溶性及等电点相差较大的杂质蛋白,SuperdexTM 75 Increase 10/300 GL进一步精细分离获得纯度在90%以上的TCR复合物蛋白.实验通过还原型和非还原型电泳及Western blot对纯化后的TCR蛋白进行分子量及空间结构鉴定,证明了TCR二聚体的原核表达与纯化的技术可行性.该研究为后续快速获得高纯度且正确折叠的TCR蛋白、进一步研究其功能和结构打下了夯实的基础.
其他文献
目的:比较罗沙司他与重组人促红素治疗血液透析患者肾性贫血的有效性和经济性.方法:采用回顾性研究,收集158例规律血液透析的肾性贫血患者的临床资料,根据用药情况分为罗沙司他组78例,重组人促红素组80例.比较两组治疗前及治疗12周后血红蛋白(Hb)、血细胞比容(Hct)、血清铁蛋白(SF)变化情况,药品不良反应发生情况及相关医疗费用.以治疗后Hb≥100 g·L-1为治疗有效,采用成本-效果法评价两组治疗方案的成本-效果比(CER)和增量成本-效果比(ICER).并进行单因素敏感性分析和概率敏感性分析.结果