【摘 要】
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为构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的反向遗传系统,根据已测定的DEN2-43全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWS
【机 构】
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军事医学科学院微生物流行病研究所,病原微生物生物安全国家重点实验室,北京,100071
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为构建登革2型病毒中国分离株(DEN2-43)的反向遗传系统,根据已测定的DEN2-43全基因组序列,利用长链RT-PCR及融合PCR扩增此病毒基因组全长cDNA分子,并将其克隆至低拷贝载体pWSK29中构建该病毒株的全长cDNA克隆.将此克隆体外转录后,经电穿孔导入宿主细胞获得恢复病毒.结果表明,获得的基因组全长cDNA克隆具有感染性,所获得的恢复病毒具有与原型病毒类似的生物学性质及乳鼠神经毒力,且可稳定传代.该反向遗传系统的构建为深入探讨登革病毒的致病机理及新型疫苗的研制奠定了基础.
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