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目的
探讨西罗莫司对急性髓系白血病U937细胞的自噬以及凋亡的影响。
方法常规方法复苏、传代培养U937细胞，然后分为4组：正常对照组和西罗莫司12 h处理组、24 h处理组和48 h处理组，分别以2 μmol/L西罗莫司处理12 h、24 h和48 h后收集细胞，观察西罗莫司不同时间点处理后U937细胞形态和生长状态的变化。采用细胞增殖及毒性检测试剂盒(CCK-8)法检测细胞的生存率；Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡；采用实时定量PCR(RT-PCR)方法检测西罗莫司处理U937细胞不同时间点后，自噬标志性蛋白微管相关蛋白轻链3Ⅱ(LC3-Ⅱ)基因mRNA表达水平的变化；Western blot方法检测西罗莫司处理U937细胞不同时间点LC3-Ⅱ蛋白表达水平的变化。
结果倒置显微镜下可见西罗莫司处理12 h、24 h和48 h后U937细胞数量逐渐减少，体积变小，细胞碎裂，细胞核固缩及细胞碎片增多；随着时间的延长，U937细胞生存率逐渐下降，与对照组比较差异有统计学意义(P＝0.031)；西罗莫司处理U937细胞12 h、24 h和48 h后，U937细胞凋亡率逐渐增加，与对照组比较差异有统计学意义(P＝0.027)；西罗莫司处理U937细胞12 h、24 h和48 h后，LC3-Ⅱ mRNA表达和蛋白的表达量均下调，与对照组比较差异有统计学意义(P＝0.029)。
结论西罗莫司可诱导U937细胞发生自噬和凋亡。自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ在基因和蛋白水平上表达均下调，提示LC3-Ⅱ可能在调控白血病细胞自噬中发挥重要作用。