研究Roundabout1(Robo1)-CAR-NK92细胞在体外对神经胶质瘤细胞U87-MG及神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y的体外杀伤以及探讨白细胞介素-15(IL-15)、IL-21和地塞米松对Robo1-CAR-NK92细胞增殖、活性和杀伤的影响以优化培养方案。
方法用慢病毒转染的方法构建Robo1-CAR-NK92细胞后分选扩增，并用流式细胞术检测阳性率。用流式细胞术的方法检测U87-MG及SH-SY5Y细胞表面Robo1的表达。用CCK-8试剂盒和动态活细胞成像的方法检测Robo1-CAR-NK92及NK92细胞对靶细胞的体外杀伤。用流式多重微珠阵列法检测杀伤过程中分泌的细胞因子含量。用锥虫蓝染色的方法检测经25 ng/ml的IL-15，25 ng/ml的IL-21和(或)50 nmol/L的地塞米松处理3 d后的Robo1-CAR-NK92及NK92细胞的计数及活性率。
结果构建Robo1-CAR-NK92细胞并经分选扩增后检测阳性率为98.89%。流式细胞术检测结果显示，Robo1在U87-MG及SH-SY5Y细胞上表达的阳性率分别为88.14%，99.75%。Robo1-CAR-NK92细胞对靶细胞的杀伤率明显高于NK92的杀伤率(P<0.05)。Robo1-CAR-NK92细胞在杀伤U87-MG细胞过程中分泌的IL-6、IL-10、TNF-α和IFN- γ较NK92细胞明显增多(P<0.05)。IL-15能促进Robo1-CAR-NK92的增殖和活性而IL-21则起相反作用。IL-21、IL-15＋IL-21能增强NK92和Robo1-CAR-NK92细胞的杀伤效果。IL联用地塞米松能增强NK92和Robo1-CAR-NK92细胞的增殖和活性，但抑制二者的杀伤效果(除IL-15和地塞米松联用不影响Robo1-CAR-NK92细胞的杀伤效果外)。
结论与NK92细胞比，Robo1-CAR-NK92细胞对神经胶质瘤及神经母细胞瘤细胞有更强大的杀伤效果。在本试验时间内，IL-15联用地塞米松处理Robo1-CAR-NK92细胞是最有利于Robo1-CAR-NK92细胞体外增殖的培养方案。