【摘 要】
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目的克隆人FLT3配体(Flt3 Ligand, FL)基因,并在大肠杆菌中对FL进行表达、纯化. 方法分离人外周血单个核细胞,提取总RNA,采用RT-巢式PCR扩增人FLT3配体胞外段基因,以双脱氧终
【机 构】
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基础部病理学教研室,第四军医大学科研部生物技术中心
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目的克隆人FLT3配体(Flt3 Ligand, FL)基因,并在大肠杆菌中对FL进行表达、纯化. 方法分离人外周血单个核细胞,提取总RNA,采用RT-巢式PCR扩增人FLT3配体胞外段基因,以双脱氧终止法进行DNA序列分析;将测序正确的目的基因克隆入大肠杆菌融合表达载体pRSET-B;重组质粒pRSET-B-FL转化大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导后,收集细菌,菌体裂解后,利用常压离子交换色谱的方法对表达蛋白进行纯化,并进行SDS-PAGE及Western-blot检测. 结果从人外周血单
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