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利用高效液相色谱法,在C18柱上以甲醇-乙腈-0.01 mol/L草酸溶液(pH 2.0)(体积比为11∶22∶67)为流动相,采用267 nm紫外光进行检测,在22 min内将7种四环素类抗生素全部洗脱并达到基线分离。探讨了流动相的pH值、草酸的浓度、流动相中有机相的比例以及检测波长等因素对分离度和灵敏度的影响。采用标准加入法定量,对两种实际样品进行了分析。结果表明:该方法操作简单、灵敏度高、定量准确。