【摘 要】
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为进一步探讨遗传性红细胞嘧啶5-核苷酸酶Ⅰ(P5N-Ⅰ)缺乏症的发病机制,在纯化人红细胞P5N-Ⅰ的基础上,分别用质谱仪和氨基酸分析仪分析其分子量及氨基酸组成,同时将该酶经胰
【机 构】
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上海市海军411医院血液科;第二军医大学长海医院血液科,上海,200433;上海复旦大学基因联合公司,上海,200092;上海市海军411医院,上海,200081;
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为进一步探讨遗传性红细胞嘧啶5-核苷酸酶Ⅰ(P5N-Ⅰ)缺乏症的发病机制,在纯化人红细胞P5N-Ⅰ的基础上,分别用质谱仪和氨基酸分析仪分析其分子量及氨基酸组成,同时将该酶经胰蛋白酶水解后进行微量测序,并行生物信息学分析.研究结果:质谱分析表明在蛋白电泳呈一条带的纯化的人红细胞P5N-Ⅰ中发现3种分子量成倍数关系,且质谱图曲线非常吻合的蛋白,分子量分别为26 952.9,55 476及110 938.测出1个酶解肽片段N末端的10个氨基酸序列为:I-E-G-P-T-I-R-Q-I-E.在数据库中未发现同源性片段.氨基酸分析表明该酶至少由18种氨基酸,约253个氨基酸残基组成.结论:人红细胞P5N-Ⅰ可能为一种多亚基组成的变构酶,生理状态下可能存在同源二聚体或四聚体.所测氨基酸序列可作为筛选目的基因的探针.所测氨基酸组成为确定其蛋白一级结构提供了重要依据.
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