【摘 要】
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采用RT-PCR方法从本实验室分离筛选到的金龟子绿僵小孢变种Metarhizium anisopliae var.anisopliae中,扩增得到Pr1A基因全长,此基因全长为1242bp,经Blastn分析此基因序列与M.
【机 构】
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中国热带农业科学院环境与植物保护研究所
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采用RT-PCR方法从本实验室分离筛选到的金龟子绿僵小孢变种Metarhizium anisopliae var.anisopliae中,扩增得到Pr1A基因全长,此基因全长为1242bp,经Blastn分析此基因序列与M.anisopliae的Pr1A基因(M73795)同源率为98%.以pET-22b(+)为基础载体,构建pET-Pr1A重组表达载体,在大肠杆菌(Escherichia.coli)BL 21(DE3)中进行表达.经SDS-PAGE分析,获得了约42kDa大小的重组目的蛋白,目的蛋白占表达总蛋白含量的63.2%.将表达的Pr1A蛋白切胶回收后制备成抗原,免疫家兔4次后,采血收集抗血清,用ELISA测定效价为1/10 000.结果表明,获得的抗体可用于更进一步的研究,将有利于我们进一步了解M.anisopliaeis的侵染机理,弄清楚各Pr蛋白酶的作用方式和对寄主的选择优势,提高生防控制的有效性.
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