【摘 要】
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目的 探讨干扰miR-148a-5p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响.方法 体外培养VSMC,分为对照组、TNF-α组、TNF-α+anti-miR-NC组和TNF-α+anti-miR-148a-5p组,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-148a-5p表达水平,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中细胞核增殖抗原Ki67、上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏附蛋白(N-
【机 构】
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郑州市第七人民医院,郑州450001
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目的 探讨干扰miR-148a-5p对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响.方法 体外培养VSMC,分为对照组、TNF-α组、TNF-α+anti-miR-NC组和TNF-α+anti-miR-148a-5p组,实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测细胞中miR-148a-5p表达水平,流式细胞术检测细胞周期和凋亡,蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞中细胞核增殖抗原Ki67、上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏附蛋白(N-cadherin)表达水平.双荧光素酶报告基因实验验证miR-148a-5p与第10号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因(PTEN)调控关系.结果 与对照组比较,TNF-α组细胞中miR-148a-5p的表达水平升高(P<0.05),G0/G1期明显降低(P<0.05),S期明显升高(P<0.05),细胞迁移数和Ki67、N-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05).与TNF-α+anti-miR-NC组比较,TNF-α+anti-miR-148a-5p组细胞G0/G1期明显升高(P<0.05),S期明显降低(P<0.05),细胞迁移数和Ki67、N-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05).双荧光素酶报告基因结果显示,miR-148a-5p可降低PTEN野生型的荧光素酶活性(P<0.05).结论 干扰miR-148a-5p表达可抑制TNF-α诱导的VSMC增殖和迁移.
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