【摘 要】
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目的 通过比较TNF-α诱导滑膜MSCs (synovium-derived MSCs,SMSCs)与BMSCs凋亡,探讨SMSCs的抗凋亡能力.方法 取患者自愿捐赠的滑膜组织及骨髓,分别采用组织贴壁法和密度梯度
【机 构】
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中山大学孙逸仙纪念医院骨外科 广州,510120;中山大学孙逸仙纪念医院生物治疗中心 广州,510120
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目的 通过比较TNF-α诱导滑膜MSCs (synovium-derived MSCs,SMSCs)与BMSCs凋亡,探讨SMSCs的抗凋亡能力.方法 取患者自愿捐赠的滑膜组织及骨髓,分别采用组织贴壁法和密度梯度离心法分离培养SMSCs和BMSCs并传代,取第3～5代细胞行细胞免疫表型及三系分化鉴定后进行实验.实验分为4组,其中SMSCs、BMSCs凋亡诱导组(SMSCs、BMSCs实验组)用20 ng/mL TNF-α和10 μg/mL放线菌酮对细胞进行凋亡诱导,其对应对照组以正常培养基培养.倒置相差显微镜下观察凋亡诱导细胞形态变化;培养24 h取各组细胞,采用细胞计数试剂盒8及流式细胞术检测细胞存活率及凋亡率,Western blot法检测细胞半胱氨酶天冬氨酶蛋白酶降解产物8、3(Cleaved Caspase-8、3)的表达.结果 经细胞表型及三系分化鉴定培养获得的细胞均符合MSCs鉴定标准.倒置相差显微镜观察示,随凋亡诱导培养时间延长,两实验组细胞形态及生长均较对应的对照组差.培养24 h,两对照组细胞存活率均为100％,未见细胞凋亡;SMSCs、BMSCs实验组细胞存活率分别降至60.13％±8.63％及46.55％±10.54％,均显著低于对照组(P＜0.05),SMSCs实验组细胞存活率显著高于BMSCs实验组(t=3.152,P=0.006).SMSCs和BMSCs对照组细胞凋亡率分别为1.12％±0.24％和1.35％±0.31％,两实验组分别增高至36.54％±8.63％及53.77％±11.52％,均显著高于对照组(P＜0.05),且SMSCs实验组细胞凋亡率显著低于BMSCs实验组(t=3.785,P=0.00l).两对照组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白几乎不表达,且SMSCs实验组和BMSCs组细胞Cleaved Caspase-8、3蛋白明显高表达;其中BMSCs实验组明显高于SMSCs实验组(t=13.870,P=0.000;t=7.309,P=0.000).结论 经TNF-α诱导培养,SMSCs凋亡明显少于BMSCs,具有更强的抗凋亡能力.
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