PCR技术在食品微生物检验中的应用探究

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  摘要:PCR技术因其灵敏性较高的特点成为食品检测中比较常用的一项技术,并且具有良好的特异性,适用于多数食品检测工作。本文阐述了食品微生物的检测方法,研究了PCR技术在食品微生物检测中的应用特点。
  关键词:PCR技术;食品安全;微生物检测
  1. 食品微生物检测方法及原理
  1.1 检测原理
  PCR是以聚合酶链式反应为基础的DNA片段扩增综合技术,这种技术的大面积应用是在1980年前后,PCR技术的一项重要应用是核酸检测。与传统的DNA复制技术相比,PCR技术可以进行更为丰富的检测和分析,从技术层面来看有较大的突破。PCR技术的反应原理是三步重复反应检测微生物来替代活细胞实现,通过热处理的方法可以将DNA的结构由双股变为单股,对于克隆技术来讲,这种改变是很大的突破。
  1.2 基本特征
  該技术具有快捷性的特点。采用PCR技术进行食品的微生物检测只需要2小时即可完成,对腐败菌进行检测也只需要一天时间。相比之下,采用传统技术需要一周时间才能完成检测。
  该技术具有准确性高的特点。由于食品中含有多种微生物,在进行微生物检测时就会遇到很大难度,依靠传统的检测手段很难检测并区分出种类繁多的微生物,这时PCR技术的优势就得到了充分体现。
  2. PCR技术要点分析
  2.1 引物设计
  引物质量决定了链段扩增的特异性质量,其中PCR引物效果对微生物特异性影响较大。当PCR引物效果得到改善时,微生物的特异性会随之增强,食品微生物检测也会变得简洁。
  2.2 模板制备
  PCR技术之所以能够准确检测食品中的微生物,是由于该技术可以准确测量食品微生物的分子信息。这种检测技术首先需要找到PCR抑制因子,并利用技术手段除去DNA蛋白和有机溶剂,这样才能够保证提取过程的质量和效率,提取的质量决定了食品检测结果的客观程度。因此,模板构建是PCR食品微生物检测的一项重要工作,进行样品处理时也要注意高质量的构建模板。
  3. PCR技术的实际应用
  首先是PCR技术应用于致病菌检测。采用传统方法检测致病菌需要消耗大量的时间和精力,传统方法检测致病菌需要经历富集培养、分离培养等培养过程,还需要形态观察、特征观察等观察过程,最后要经过血清鉴定环节。这些检测过程需要五天时间,因此传统检测手段在实时性上没有任何优势。
  首先采用PCR技术进行食品微生物检测在时间上有较大优势,主要分为以下三个环节:第一个环节是富集细菌细胞。通过对食品样品进行离心沉淀并采用滤膜进行过滤的方法,可以实现富集细菌细胞的目的。第二个环节是裂解和扩增。采用DNA释放技术将DNA从细胞中分离,去除其中含有的蛋白质等杂质,并利用PCR扩增技术扩增目标DNA序列。第三个环节是DNA序列的检测过程。这个过程可以通过电泳法来完成,也可以通过核酸探针法来完成。
  其次是PCR技术应用于非致病菌检测。在进行非致病菌检测时该技术主要用于乳酸菌检测。乳酸菌是非常常见的非致病菌种,并且具有较高的生物学价值和化学价值,通常乳酸菌对人的身体是有益处的。在真空的环境中乳酸菌能够长时间存活,这一点是与其他菌种不同的地方。
  4. PCR技术注意事项
  4.1 高度重视PCR模板制备
  PCR抑制因子的存在对PCR检测技术的准确性有一定影响,食品中存在的抑制因子数量庞大、种类繁多,在进行检测之前要采取一定的手段清除食品中的PCR抑制因子,如果不彻底清除PCR抑制因子,就会在后续检测过程中受到较大影响。
  4.2 高度重视污染问题
  采用PCR技术在进行检测时,会产生环境污染问题,而且由于PCR的技术特点导致造成环境污染的可能性较大。为了防止出现严重的污染问题,要制定一系列法规和制度来规范检测过程与工作人员的操作行为,并且定期检查枪头,发现枪头不符合要求应该及时更换,以避免交叉感染。
  结语
  近年来,我国社会经济不断发展,食品安全受到了越来越广泛的关注。在这种背景下,PCR技术的应用逐渐普及,在发展的过程中不仅实现了纵向延伸,技术深度达到了较高的水平,也实现了横向拓宽,PCR技术类型不断丰富,能够实现的功能也越来越多。但PCR技术仍有很大的提升空间,需要科研人员不断努力,争取早日实现突破,为国家食品安全作出贡献。
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