【摘 要】
：
目的:为揭示E1A激活基因阻遏子(CREG1)在人血管平滑肌细胞(VSMCs)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中表达的调控机制,构建人CREG1(hCREG1)启动子报告基因载体,探讨CREG1在不同血管
【机 构】
：
沈阳军区总医院全军心血管病研究所心内科,辽宁,沈阳110016;
论文部分内容阅读
目的:为揭示E1A激活基因阻遏子(CREG1)在人血管平滑肌细胞(VSMCs)和人脐静脉内皮细胞(HUVECs)中表达的调控机制,构建人CREG1(hCREG1)启动子报告基因载体,探讨CREG1在不同血管细胞中的表达.方法:在对hCREG1进行生物信息学分析的基础上,以人基因组DNA为模板,PCR方法扩增含有hCREG1基因上游-3 677 bp序列,构建了hCREG1 5上游-3 677 bp、-2 310 bp和-945 bp序列片段,分别将这3个序列克隆到pMD18-T载体上并定向亚克隆到pEGFP-1报告基因载体-pEGFP-hCREGI-P3677、pEGFP-hCREG1-P2310和pEGFP-hCREG1-P945.将重组质粒瞬时转染VSMCs株HITASY和HUVECs,检测绿色荧光蛋白(GFP)的表达.结果:经测序鉴定证实,3个报告基因载体中插入的PCR扩增序列均与hCREG1基因上游DNA序列完全匹配.瞬时转染体外培养的人VSMCs和HUVECs后,经荧光观察和蛋白质印迹(West blotting)证实,细胞内存在GFP的表达,并且0.5%FBS培养的HITASY细胞中GFP表达较10%FBS培养的细胞中明显增加.HU-VECs中的GFP表达较人VSMCs明显增加.结论:hCREG1基因启动子报告基因载体构建成功,核心启动子存在于5上游序列的-945 bp-0 bp区域,为进一步研究hCREG1基因表达提供了条件.
其他文献
目的 探讨黄连素对大鼠局灶性脑缺血再灌注后脑组织CDK4和cyclin D1表达的调节以及黄连素可能的脑保护作用机制.方法 50只雄性Wistar大鼠按照随机数字表法分为给药组(n=15)、
目的 建立骨髓基质细胞(BMSC)固紫B盐细胞化学染色法,并评估其临床应用价值.方法 将传代培养的BMSC、骨髓、胸腔积液及腹腔积液标本制成涂片,行固紫B盐染色,观察细胞的着色情
目的 应用治疗指数(therapeutic index,TX)(TX=肿瘤相关5年生存率×区域淋巴结转移的概率)评估侧方淋巴结清扣对于改善进展期低位直肠癌预后的价值.方法 回顾性分析直肠癌行
目的 探讨人胚胎发育过程中碱性成纤维细胞生长因子1(FGF1)对造血细胞形成的影响,研究FGF1、血管内皮生长因子受体(KDR)、CD133、CD34和转录凶子Ihh、SCL、GATA-1、GATA-2和P
目的 对邯郸市眼科医院青光眼的住院病人5年构成和视力损害情况进行分析.方法 对2001～2005年邯郸市眼科医院住院患者中不同类型青光眼进行回顾性分析.结果 962例患者中,男性32
目的 探讨肾移植受者留置导尿更换集尿袋时机.方法 采用排除标准选出2006年1-12月行同种异体肾移植手术的受者52例,随机数字法分组并于术后第2～8天进行尿培养后更换集尿袋,对
目的 评估肿瘤型M2-丙酮酸激酶(Tu M2-PK)在乳腺癌诊断与疗效监测中的应用价值.方法 用ELISA检测63例乳腺癌患者、22例乳腺良性疾病患者及40名健康对照者血浆Tu M2-PK水平,并
目的 研究视黄酸(RA)诱导人神经前体细胞(hNPCs)分化的过程中,细胞周期调节蛋白p27Kip1的变化及其调节机制,以掌握hNPCs的增殖分化特性.方法 取原代hNPCs体外培养,在细胞进入
目的:回顾我国糖尿病的患病率、死亡率和并发症及其疾病负担的现况与影响因素.方法:检索PUBMED和CBM中1994-2007年发表的涉及我国糖尿病流行病学和经济学内容的文献.结果:近
目的:研究微创穿刺术治疗高血压脑出血的最佳时机.方法:41例高血压脑出血随机分为4组,即手术距发病时间18～24 h组(P