论文部分内容阅读
目的 用纯化的重组刚地弓形虫RH株主要表面抗原1(SAG1)作为检测抗原，建立间接法rSAG1-ELISA，检测弓形虫IgG抗体并与国外进口试剂盒进行比较，以观察其阳性和阴性符合率；并对rSAG1-ELISA检测的精确度、灵敏度和特异性进行评价。方法接种重组菌至LB肉汤中，IPTG诱导表达后，用Ni^2+螯合柱进行亲和纯化；分别用不同浓度的重组抗原rSAG1包被聚苯乙烯酶标条，检测不同稀释度的阳性和阴性血清，以辣根过氧化物酶标记的羊抗人IgG为二抗，采用正交试验确定rSAG1-ELISA的最佳检测条件；按rSAG1-ELISA法的最佳检测条件对混合弓形虫IgG阳性和阴性血清重复测20次进行精确度的检测；采用抗体抑制试验检测其特异性；同时对用进口试剂盒筛得的52份弓形虫IgG阳性血清和40份弓形虫IgG阴性血清进行检测。结果制备的rSAG1重组蛋白纯度在90％以上；以该重组抗原建立的rSAG1-ELISA的最佳检测条件为：重组抗原rSAG1的包被浓度为5μg/ml，血清稀释度1：100，酶标记的羊抗人IgG1：2000稀释；用rSAG1-ELISA对混合弓形虫IgG阳性和阴性血清的重复检测表明：IgG阳性血清的检测值的变异系数(CV值)为10．9％，IgG阴性血清的CV值为10．7%；灵敏度检测表明血清稀释度在1：50～1：200均可检出阳性；特异性试验的抑制率为62．6％；rSAG1-ELISA与进口试剂盒的总符合率为87％，其中阳性和阴性符合率分别为81％(42／52)和95％(38／40)。结论rSAG1一ELISA具有较好的灵敏性和特异性，与进口试剂盒相比有较高的符合率，表明该法具有较好的弓形体病诊断价值，可进一步推广应用。