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研究Huh7.93细胞与慢性乙型肝炎患者外周血单个核细胞(cPBMCs)共培养能否模拟慢性乙型肝炎患者体内乙型肝炎病毒(HBV)的复制特点及免疫功能状态,为研究慢性HBV感染的免疫清除机制提供体外共培养细胞系统。
方法Huh7.93细胞单独培养及分别与健康体检者外周血单个核细胞、cPBMCs共培养7 d。细胞增殖与毒性检测(CCK8)试剂盒检测Huh7.93细胞的增殖活性,荧光定量PCR、Southern blot等方法检测cPBMCs中及共培养细胞中HBV复制情况。两组间比较用独立样本t检验。
结果一定比例的Huh7.93细胞与PBMCs共培养后Huh7.93细胞增殖活性较高,细胞生长状态良好。HBV不能感染cPBMCs并在其内复制。Huh7.93细胞与cPBMCs共培养后细胞培养上清液中HBV DNA定量在第4天[(6.01±0.20)log10拷贝/ml]、第7天[(7.82±0.24)log10拷贝/ml]明显增加,与Huh7.93细胞单独培养[分别为(4.99±0.08) log10拷贝/ml、(6.96±0.09)log10拷贝/ml)比较,差异均有统计学意义(P值均< 0.01)。Huh7.93细胞与cPBMCs共培养后第7天细胞裂解液中HBV复制中间体均比Huh7.93细胞单独培养明显增加。HepG2.2.15细胞与cPBMCs共培养后HBV复制无明显增加。
结论Huh7.93细胞与cPBMCs共培养后类似于人体感染HBV后的病毒复制规律,能够很好地模拟慢性乙型肝炎患者的肝脏微环境及免疫功能状态,为体外研究慢性HBV感染的免疫清除机制提供了新的方法。