脂肪间充质干细胞向肝细胞横向分化的研究

来源 :中华肝脏病杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wangwei4833250
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目的 探讨脂肪源性间充质干细胞(AMSC)向肝细胞横向分化的可能性.方法 胶原酶消化脂肪组织,贴壁培养,体外扩增后以流式细胞仪鉴定其表面标志.取扩增3代的AMSC分为2组,诱导分化组在含有2%FBS的DMEM F12培养基中加入肝细胞生长因子20 ng/ml和成纤维细胞生长因子4 10ng/ml、1×ITS和地塞米松0.1μmol/L,培养14 d;空白对照组则不加任何细胞因子.RT-PCR检测诱导分化过程中肝细胞核因子1、GATA4等基因转录水平的变化.2周后,采用流式细胞术检测AFP和Alb阳性细胞在两组细胞中的比例,检测肝细胞特异性细胞角蛋白(CK)18、CK19的表达.结果 分离、培养的AMSC呈成纤维细胞样生长,可以稳定传代.流式细胞术检测结果显示第3代脂肪间充质干细胞高表达表面CD29、CD44;不表达CD34、CD45.RT-PCR检测诱导5、8、11、14 d的细胞,显示有肝细胞特异性转录因子GATA4和肝细胞核因子1A基因的表达,并随时间延长而逐渐增多.流式细胞术检测诱导14 d的细胞,发现30.0%的细胞表达Alb,17.8%细胞表达AFP,双阳性的细胞为6.9%;免疫荧光检测发现诱导细胞表达CK18、CK19.空白对照组脂肪间充质干细胞则未见上述各项变化.结论 在低血清培养体系中,采用细胞因子联合诱导,显示脂肪间充质细胞在体外能定向分化为肝细胞样细胞。

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