【摘 要】
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目的 克隆、表达粉尘螨聚泛素样蛋白(polyubiquitin,poly-u)的编码基因全长并制备表达质粒,对表达产物进行生物学预测和分析.方法 根据转录组测序及其功能注释结果,以粉尘螨Total RNA为模板,RT-PCR和RACE技术获得全长基因后构建原核表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)T1R感受态细胞中,利用异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.采用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的生物学特征.结果 获得了粉尘
【机 构】
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南京医科大学附属无锡人民医院医学检验科,江苏无锡214023;南京医科大学附属无锡儿童医院儿科实验室
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目的 克隆、表达粉尘螨聚泛素样蛋白(polyubiquitin,poly-u)的编码基因全长并制备表达质粒,对表达产物进行生物学预测和分析.方法 根据转录组测序及其功能注释结果,以粉尘螨Total RNA为模板,RT-PCR和RACE技术获得全长基因后构建原核表达质粒,转化E.coli BL21(DE3)T1R感受态细胞中,利用异丙基-b-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物.采用生物信息学软件分析该基因及其编码蛋白的生物学特征.结果 获得了粉尘螨聚泛素样蛋白的编码基因,全长1644 bp,构建的原核表达质粒pET28a(+)-poly-u转化BL21后经IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定均可见目的 蛋白条带.生物信息学分析该基因编码的蛋白质由547个氨基酸组成,相对分子质量为61.3×103.预测二级结构包括α-螺旋(占32.54％)、延伸主链(占15.36％)和无规卷曲(占52.10％),优势表位可能为TGGQQMGR、LEDRRTL、IQDKEQIPPDQ.结论 成功获得粉尘螨聚泛素样蛋白的编码基因全长及其原核表达质粒,并对其生物学特征进行了分析,为进一步针对该基因开发尘螨防制措施奠定了基础.
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