环孢菌素A对NK细胞免疫球蛋白样转录子4的表达和杀伤功能的影响

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目的 探讨CsA对NK细胞抑制性受体ILT4的表达及NK细胞杀伤功能的影响.方法 以10 mg/L CsA分别处理NK细胞12、24、36 h作为3个实验组,以DMSO分别作用NK细胞12、24、36 h作为3个对照组.通过RT-qPCR和流式细胞术分别检测各组中NK细胞ILT4 mRNA和蛋白表达变化,同时测定人胃癌细胞株BGC-823、绒毛膜癌细胞株JEG-3 HLA-G的表达,采用MTT法检测NK细胞经CsA处理36 h前后对肿瘤细胞杀伤活性的变化.用药处理不同时间段ILT4表达数据比较先使用单因素方差分析,再进行各均数间两两比较Dunnett t检验,而JEG-3、BGC-823细胞HLA-G的表达差异及NK细胞对JEG-3、BGC-823细胞的杀伤活性比较采用t检验.结果 用RT-qPCR检测经CsA处理12、24、36 h组的NK细胞ILT4 mRNA相对表达水平依次为0.99±0.27、1.79±0.29、6.79±0.64,经DMSO处理的对照组分别为0.86±0.11、0.94±0.12、1.06±0.17;CsA处理NK细胞24、36 h组的ILT4表达较对照组明显增加(t值分别为4.69、14.99,P均<0.05),而作用12 h前后组间的差异无统计学意义(t=0.78,P>0.05).用流式细胞术检测经CsA处理12、24、36 h组的NK细胞ILT4蛋白表达阳性率分别为(5.16±0.42)%、(6.23±0.48)%、(23.8±1.5)%,分别高于经DMSO处理12、24、36 h组[(3.08±0.19)%、(3.35±0.12)%、(3.36±0.21)%],且不同处理组在不同处理时间的阳性率比较差异有统计学意义(t值分别为7.70、10.06、20.72,P均<0.01);CsA处理NK细胞36 h组的ILT4 mRNA和蛋白表达均显著高于处理12 h和24h组(t值分别为16.38、14.12、21.81、20.56;P均<0.01).同时,当经CsA处理前后且效靶比为10∶1时,NK细胞对低表达HLA-G的肿瘤细胞BGC-823的杀伤率分别为(81.96±2.80)%、(60.23±1.57)%,CsA对NK细胞杀伤活性的抑制率为(26.48±2.42)%;而NK细胞对高表达HLA-G的JEG-3细胞的杀伤率分别是(53.46±2.21)%、(28.30±1.85)%,抑制率为(47.10±1.59)%.经CsA处理前后NK细胞对肿瘤细胞杀伤活性的变化表明CsA可抑制NK细胞对BGC-823和JEG-3细胞的杀伤(t值分别为11.74、15.16,P均<0.01),对JEG-3细胞杀伤抑制率显著高于对BGC-823细胞的杀伤抑制率(t=12.31,P<0.01).结论 CsA可上调NK细胞抑制性受体ILT4的表达,并通过ILT4与HLA-G相互作用影响NK对肿瘤细胞的杀伤.
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