研究野生型BRAF及突变型BRAFV600E背景下Mps1激酶对BRAFWT/MEK/ERK通路的影响。
方法(1)在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中单独或联合转染pBabe–puro–GST–BRAF–WT/pBabe–puro–GST–BRAFV600E、pBabe–puro–GFP–Mps1–WT及空载体，应用Western blot方法来检测Mps1及p–ERK表达水平。(2)用pSUPER–Mps1反转录病毒感染BRAF野生型及BRAFV600E突变型背景黑色素瘤细胞，敲低内源性Mps1，Western blot法检测Mps1及p–ERK表达水平。(3)在BRAFV600E突变型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe–puro–GFP–Mps1，Western blot法检测Mps1及p–ERK表达水平。
结果(1)在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe–puro–GST–BRAF–WT及pBabe–puro–GFP–Mps1–WT，与未处理组及转染空载体组相比，p–ERK水平显著降低(P<0.01)；在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中转染pBabe–puro–GST–BRAFV600E及pBabe–puro–GFP–Mps1–WT，与未处理组及转染空载体组相比，p–ERK表达水平未发生明显变化。(2)在BRAF野生型背景的黑色素瘤细胞中敲低内源性Mps1后，与对照组相比p–ERK含量增多；而在BRAFV600E突变型黑色素瘤细胞中敲低内源性Mps1后，与对照组相比p–ERK含量未发生明显变化。(3)转染Mps1的BRAFV600E突变型细胞中p–ERK水平较对照组及空载体组没有发生显著变化。
结论Mps1激酶和BRAFWT/MEK/ERK通路之间存在一条自动调节的负反馈回路，而癌基因BRAFV600E表现出对该负反馈回路的抵抗作用。