目的:以百日咳毒素S1亚基启动子ptxA-Pr基因和插入序列IS481为目的基因,建立敏感、特异的双重PCR快速检测百日咳杆菌方法。方法:运用百日咳杆菌ptxA-Pr和IS481基因序列特异性引物,采用双重PCR技术同时扩增百日咳杆菌的特异性基因ptxA-Pr和IS481。通过构建目的质粒获得阳性对照,测序并与GenBank比对序列验证扩增产物。百日咳标准菌株DNA10倍系列稀释为模板,采用此方法扩增双基因,检测此方法敏感性。扩增肺炎克雷伯菌、肺炎链球菌、铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌及阳性样本DNA,检测此方法特异性。结果:百日咳杆菌标准株和阳性样本均能同时扩增ptxA-Pr和IS481目标序列,分别为191、145bp。构建质粒后测序结果与GenBank对比一致。每个反应体系能检测到的标准菌株核酸最小量为1.65×10-2ng。其他菌株检测未出现非特异性扩增。结论:双重PCR扩增百日咳杆菌ptxA-Pr和IS481基因的方法可用来特异快速的检测百日咳杆菌。