【摘 要】
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目的制备抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体. 方法从分泌抗人组织蛋白酶B单克隆抗体的杂交瘤细胞株提取总RNA,通过RT-PCR扩增单克隆抗体VH和VL的DNA片段,对其进行序列分析,证实具
【机 构】
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广西医科大学微生物学和免疫学教研室,斯洛文尼亚Jozef
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目的制备抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体. 方法从分泌抗人组织蛋白酶B单克隆抗体的杂交瘤细胞株提取总RNA,通过RT-PCR扩增单克隆抗体VH和VL的DNA片段,对其进行序列分析,证实具有小鼠可变区完整的结构,利用基因工程技术将它们分别和人Ig的Cγ1和Cκ恒定区基因连接组建人鼠嵌合轻链和重链Fab抗体,并克隆到pcDNA3真核细胞表达载体.将重组体转染到中国仓鼠卵巢细胞 (CHO),通过G418筛选、ELISA检测和Western blot鉴定,分离纯化抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体,用于体外抑制癌细胞浸润的试验. 结果得到分泌抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体的中国仓鼠卵巢细胞克隆(C62A2),分泌的抗人组织蛋白酶B人-鼠嵌合抗体在体外能抑制癌细胞浸润. 结论人-鼠嵌合抗体的成功表达,将有可能用于组织蛋白酶B过度表达的有关疾病的治疗.
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