【摘 要】
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目的 观察石英诱导恶性转化的人胚肺成纤维细胞(T-HELF)中p53蛋白的表达量,并探讨p53蛋白对p21、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达量及蛋白间相互作用的
【机 构】
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中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所,北京 100050
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目的 观察石英诱导恶性转化的人胚肺成纤维细胞(T-HELF)中p53蛋白的表达量,并探讨p53蛋白对p21、细胞周期蛋白D1和细胞周期蛋白依赖激酶4(CDK4)蛋白表达量及蛋白间相互作用的影响.方法 利用胞浆胞核分离技术,分别提取人胚肺成纤维细胞(HELF)、T-HELF胞浆和胞核蛋白,运用Western blot检测p53、磷酸化p53及p21蛋白在细胞中的表达量及分布.利用RNA干扰技术,在T-HELF中转染2μg p53 siRNA,同时设立转染CMV-neo空白载体质粒的对照组,观察p53、磷酸化p53、p21、细胞周期蛋白D1和CDK4的蛋白表达量及改变.用免疫沉淀方法检测HELF和T-HELF中p21、细胞周期蛋白D1及CDK4蛋白结合物水平的变化,并在T-HELF中分别加入20 μmol/L p53化学抑制剂pifithrin-α(PFT-α)和2μgp53转染质粒,观察其对p21、细胞周期蛋白D1及CDK4蛋白间相互作用的影响.结果 石英刺激HELF可引起胞核中p53及磷酸化p53蛋白表达量显著增高(P＜0.05),T-HELF胞核中p53的蛋白表达量较HELF显著降低(P＜0.05).转染p53siRNA后,p53蛋白与对照组相比表达下降,p21及细胞周期蛋白D1蛋白表达量增加,差异均有统计学意义(P＜0.05),尚未观察到CDK4蛋白表达量的变化(P＞0.05).免疫沉淀结果显示抑制p53的表达可下调p21与细胞周期蛋白D1蛋白复合物的表达量(P＜0.05),但尚未观察到其对p21、细胞周期蛋白D1与CDK4蛋白结合的影响(P＞0.05).结论 p53可通过调控p21、细胞周期蛋白D1的蛋白表达和蛋白间相互作用参与石英诱导的恶性转化过程.
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