【摘 要】
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目的 探讨宫颈癌大鼠模型癌组织中DAPK基因启动子甲基化与宫颈癌发展和转移的关联.方法 选择45只成年雌性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,通过皮下注射宫颈癌SiHa细胞建立异种移植瘤动物模型.选取其中35只大鼠进行甲基化实验分组:对照组(正常大鼠,腹腔注射DMSO,n=10),宫颈癌组(宫颈癌大鼠模型,n=25)和宫颈癌邻近组(与宫颈癌组为相同大鼠,获取癌旁组织样本,n=25),通过甲基化特异性聚合酶链式反应分析各组大鼠组织的DAPK甲基化状态;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析大
【机 构】
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延安大学附属医院肿瘤科二病区 陕西 延安 716000;榆林市第二医院妇产科 陕西 榆林 719000
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目的 探讨宫颈癌大鼠模型癌组织中DAPK基因启动子甲基化与宫颈癌发展和转移的关联.方法 选择45只成年雌性Sprague-Dawley大鼠为研究对象,通过皮下注射宫颈癌SiHa细胞建立异种移植瘤动物模型.选取其中35只大鼠进行甲基化实验分组:对照组(正常大鼠,腹腔注射DMSO,n=10),宫颈癌组(宫颈癌大鼠模型,n=25)和宫颈癌邻近组(与宫颈癌组为相同大鼠,获取癌旁组织样本,n=25),通过甲基化特异性聚合酶链式反应分析各组大鼠组织的DAPK甲基化状态;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)分析大鼠组织中DAPK mRNA的表达.同时将剩余10只宫颈癌大鼠根据实验目的分为宫颈癌组(宫颈癌大鼠模型,给予DMSO腹腔注射,n=5)和甲基化抑制组(在宫颈癌大鼠的模型中注射1 mg/g 5-Aza-CdR,n=5),每周1次,注射至第40天,游标卡尺测量并计算异种移植大鼠肿瘤体积生长,并对肿瘤组织进行称重分析;RT-PCR分析大鼠组织中DAPK mRNA的表达.结果 对照组大鼠未出现甲基化,宫颈癌组有19只大鼠肿瘤出现了DAPK甲基化,甲基化率为76.00％,宫颈癌邻近组4只出现DAPK甲基化,甲基化率为16.00％,宫颈癌组较对照组和宫颈癌邻近组的DAPK甲基化率升高,宫颈癌邻近组较对照组DAPK甲基化率升高,差异有统计学意义(P<0.05).在任何具有启动子甲基化的肿瘤组织或邻近组织中均未检测到DAPK mRNA的表达,在所有启动子未甲基化的肿瘤组织、肿瘤邻近组织和正常组织中均检测到DAPK mRNA的表达,甲基化组织DAPK mRNA的表达显著低于未甲基化组织,差异有统计学意义(P0.05),注射后第20、30、40天甲基化抑制组较宫颈癌组大鼠肿瘤体积和重量减小,差异有统计学意义(P<0.05).仅用PBS处理的大鼠的肿瘤组织中都没有发现DAPK mRNA表达,而在来自用5-Aza-CdR处理的大鼠的所有肿瘤中检测到DAPK mRNA的重新表达,两组比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 DAPK表达的丧失可能与宫颈癌中异常的启动子区域甲基化有关,DAPK甲基化抑制可减缓体内SiHa细胞的生长,证实了DAPK基因启动子高甲基化与宫颈癌癌变的发展转移有紧密联系.
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