【摘 要】
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目的 用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号传导通路的影响.方法 分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105/ml)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106/ml),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型.实验分4组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新
【机 构】
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目的 用小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型,探讨落新妇甙对心脏移植排斥反应中活化T细胞蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)信号传导通路的影响.方法 分离BALB/C小鼠心肌细胞(2×105/ml)和C57BL/6小鼠的脾细胞(1×106/ml),前者做刺激细胞,后者做反应细胞,进行混合细胞培养,建立小鼠心脏移植急性排斥反应体外模型.实验分4组:对照组,心肌细胞与脾细胞混合培养;落新妇甙组,在对照组基础上加入落新妇甙(15 μg/ml);落新妇甙加PKC激动剂组,在对照组基础上加入落新妇甙(15 μg/ml)和PKC激动剂PMA(10 nmol/L);落新妇甙加PKC抑制剂组,在对照组基础上加入落新妇甙(15 μg/ml)和PKC抑制剂CHE(10 μmol/L).TUNEL法检测T淋巴细胞凋亡情况.RT-PCR和Western blot法检测T细胞PKC、NF-κB,caspase-3和Bcl-2表达情况.结果 落新妇甙组T细胞凋亡指数和caspase-3明显高于对照组(P＜0.01),PKC、NF-κB和Bcl-2表达显著低于对照组(P＜0.01).落新妇甙加PKC抑制剂组T细胞凋亡指数和caspase-3显著高于落新妇甙组,PKC、NF-κB和Bcl-2表达显著低于落新妇甙组(P＜0.01).落新妇甙加PKC激动剂组T细胞凋亡指数,caspase-3、PKC、NF-κB和Bcl-2表达与对照组的差异无统计学意义(P＞0.05).结论 落新妇甙诱导心脏移植排斥反应中活化T细胞凋亡与其抑制PKC信号传导通路有关。
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