【摘 要】
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为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术
【机 构】
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西南大学植物保护学院,浙江大学农业与生物技术学院,湖南省植物保护研究所,
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为明确重庆地区辣椒上番茄斑萎病毒(Tomato spotted wilt virus,TSWV)的发生情况及其外壳蛋白基因(cp)序列变异特征,采用斑点免疫杂交法(Dot-ELISA)和反转录PCR(RT-PCR)技术对采自重庆的298份辣椒病毒病样品进行了检测和分子鉴定。Dot-ELISA检测结果表明,有40份辣椒样品检测到TSWV,检出率为13.42%。通过电子显微镜在TSWV检测呈阳性的样品中观察到具包膜的球状病毒粒体。设计扩增TSWV cp的引物,选取6个TSWV阳性样品进行RT-PCR扩增,均扩增到大小约750 bp的目的片段。序列分析表明,重庆辣椒分离物TSWV-CQ(KX611497)与已报道的22个TSWV分离物cp基因的核苷酸相似性为96.1%~99.4%,与已报道的TSWV中国分离物亲缘关系较近,表现出明显的地理相关性。
To determine the occurrence of Tomato spotted wilt virus (TSWV) and the variation of its coat protein gene (cp) sequence in pepper in Chongqing, Dot-ELISA and reverse transcription-polymerase chain reaction -PCR) technique was used to detect and identify 298 pepper virus samples collected from Chongqing. Dot-ELISA test results showed that 40 pepper samples detected TSWV, the detection rate was 13.42%. Enveloped globular virosomes were observed by electron microscopy in samples that tested positive for TSWV. The primers for amplifying TSWV cp were designed. Six TSWV positive samples were selected for RT-PCR amplification and amplified to about 750 bp in size. Sequence analysis showed that the nucleotide similarity of Chongqing chilli isolate TSWV-CQ (KX611497) and reported 22 cp genes of TSWV isolates was 96.1% ~ 99.4%, which was close to the reported TSWV China isolate , Showing a clear geographical relevance.
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