【摘 要】
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常用的基因治疗表达载体有病毒表达载体和质粒表达载体,这两类传统基因治疗载体含有大量病毒或细菌DNA序列,会引发人体较严重的免疫反应、细胞炎症、细胞毒性副作用、以及基
【机 构】
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中国药科大学生命科学与技术学院,江苏南京,210009;中国科学院苏州生物医学工程技术研究所,苏州市分子诊断和治疗技术重点实验室,江苏苏州215163
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常用的基因治疗表达载体有病毒表达载体和质粒表达载体,这两类传统基因治疗载体含有大量病毒或细菌DNA序列,会引发人体较严重的免疫反应、细胞炎症、细胞毒性副作用、以及基因表达沉默化,是基因治疗应用于人类疾病治疗的一大障碍.项目构建了一种新型的、基于腺相关病毒(AAV)倒置末端重复序列(ITR)的基因表达单链微载体(AAV-ITR mini vector),并用GFP基因作为报告基因.通过热变性的方法制备单链DNA,然后将带有GFP的质粒、双链DNA载体、AAV-ITR基因表达微载体转入真核表达细胞,采用荧光显微镜观察和流式细胞仪检测等较为简单的方法来检测其表达效率.实验结果显示,AAV-ITR基因表达微载体在293T细胞中具有较高的转染、表达效率,并且具有类似AAV病毒载体的特性.该研究结果将有助于进一步研发类似于AAV病毒载体的安全、无免疫原性的人造基因治疗载体.
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