西瓜种质资源遗传多样性分析的 SSR核心引物构建与验证

来源 :中国瓜菜 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zm_627
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  目的与意义:西瓜作为重要的经济作物,在我国种植业结构调整和促进农民致富增收中发挥着重要作用。当前西瓜生产中种子质量问题比较突出和普遍,种子纯度不够和假种子坑农事件常有发生,严重干扰了种业的健康发展,也是对品种创新与知识产权保护的严重损害。常规的品种鉴定难以依靠品种形态特征进行准确、快速的品种鉴别。SSR技术具有共显性、重复性好等优点,但如果将基因组的所有SSR位点对供试种质一一进行分析,需要耗费大量的人力和物力。针对上述现有技术的问题,本研究将依据西瓜基因组序列开发一套SSR核心标记,可用于西瓜种质资源核酸指纹库构建和遗传背景等研究。
  材料与方法:(1)供试材料为北京市农林科学院蔬菜研究中心的17份重测序材料和100份遗传背景清晰的育种材料。(2)SNP数据:利用Illumina GAII测序平台对东亚生态型西瓜自交系‘97103’和其他16份材料进行全基因组测序和重测序,获得的相关数据。(3)西瓜SSR核心引物的开发策略:第一,依据覆盖整个基因组的近390万个SNP位点对17份重测序材料绘制SNP系统发育树。第二,以栽培种‘97103’(东亚生态类型)和‘Sugarlee’(美洲生态类型)为材料,利用西瓜高密度遗传图谱中双亲表现多态的704对SSR引物,获得在2个栽培种之间中具有多态性的78对SSR引物。第三,利用上述78对SSR引物对17份重测序材料进行扩增。在此基础上,不断调整各种引物组合,最终获得23对核心引物组合。引物挑选原则是UPGMA聚类图与SNP系统发育树基本一致;PIC值大于0.45;标记数目最少和每个连锁群至少有一个标记;电泳条带清晰、便于统计。(4)数据统计与分析:利用Freetree软件的基于Nei-Li遗传相似系数的UPGMA法,计算17份重测序材料的遗传相似性并构建UPGMA聚类图,利用Powermarker v3.0软件进行117份供试材料的UPGMA聚类分析,并采用Dendroscope软件构建聚类图。
  结果与分析:(1)基于SNP标记分析17份重测序材料的遗传多样性:17个重新测序材料,共包含3 889 080个SNP,由于系统发育树是通过比较全基因组序列得到的,因此能正确显示不同测序品种的特异性。UPGMA系统发育树,将其分成2大类,与传统的植物学分类结果完全一致。(2)基于78对SSR引物分析17份重测序材料的遗传多样性:78对多态性引物,在17份重测序材料中共检测到285个等位基因变异,位点多态性信息含量(PIC)为0.11~0.82,平均0.6。利用78对多态性引物構建的UPGMA聚类图与SNP系统发育树基本一致,因此,可以将78对多态性引物作为备选引物。(3)西瓜SSR核心引物的开发与验证:根据核心引物开发策略,共获得23对核心引物(原表4)。23对核心引物,在17份重测序材料中,共检测到97个等位基因,位点多态性信息含量(PIC)为0.45-0.82,平均0.66。23个核心引物和78个备选引物构建的系统发育树图基本相同,而且其遗传相似系数矩阵之间的相关系数表现为显著相关(r=0.96,P
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