反义RNA抑制Survivin在人骨肉瘤细胞系MG63中表达的实验研究

来源 :中国矫形外科杂志 | 被引量 : 0次 | 上传用户:luke_kai
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[目的] 研究人骨肉瘤细胞MG63中反义RNA对Survivin表达的抑制作用.[方法] 培养骨肉瘤细胞MG63,采用RT-PCR的方法克隆人Survivin基因编码区cDNA.构建Survivin的反义诱导表达载体.转染MG63细胞,G418筛选稳定转染的细胞系.稳定转染的细胞系,以ZnSO4120 μmol/L诱导,HE染色、Survivin免疫细胞化学染色透射电镜等形态学观察.绘制生长曲线.RT-PCR检测各组细胞Survivin的表达.Annexin V法检测细胞凋亡.[结果] RT-PCR从MG63细胞mRNA扩增了Survivin编码区cDNA,约420 bp.构建了pMDNA3-anti-Survivin重组质粒.转染MG63细胞,G418 1 000μg/ml筛选4周后,建成稳定转染细胞系.通过ZnSO4 120 μmol/L诱导,电子显微镜观察可见MG63/pMDNA3-anti-Survivin细胞出现凋亡.免疫细胞化学染色可见诱导后的MG63/pMDNA3-anti-Survivin Survivin蛋白表达明显降低.Annexin V染色后发现pMDNA3-anti-Survivin细胞,在ZnSO4诱导48 h后凋亡率达到11%,较对照组高出3倍.[结论] Survivin的反义RNA能够有效的抑制Survivin的表达,从而抑制肿瘤生长,并促进肿瘤细胞凋亡.
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